Ruoan kulutuksen vaikutus metaboliseen oireyhtymään liittyvään mikroRNA:han (EFCMRNAMS)

Opintojen suunnittelu. Tämä on satunnaistettu tutkimus. Universidad Juárez Autónoma de Tabascon (UJAT) fuksiopiskelijoille tehdään kliiniset laboratoriotestit osana heidän ilmoittautumisprosessiaan yliopistoon. Viisikymmentä naista kutsutaan osallistumaan, koska DACS:n ilmoittautumiset ovat pääosin naisia. Verinäytteet otetaan kliinisiä ja molekyylianalyysejä varten protokollan alussa ja lopussa (kolme kuukautta). Antropometriset mittaukset tehdään myös tutkimuksen alussa ja lopussa. Kolmen kuukauden aikana tarjotaan perinteistä ruokaa sisältävä ruokalaji 5 päivänä viikossa. Ruoka sisältää keskimäärin 600 Kcal, ≤ 50 mg kolesterolia, ≥ 10 g kuitua, ≥ 130 g kasviksia ja ≤ de 200 mg natriumia. Jokaisen ruuan mukana tulee 3 normaalikokoista maissitortillaa. Vertailuryhmä saa kampuksen kahvilasta tavanomaisesti kulutettua pikaruokaa samankaltaisella kalorisuhteella (Muñoz et al., painossa)

Antropometriikka. Kehon massaindeksin (BMI) määrittämiseen käytetään Maailman terveysjärjestön (2011) ohjeiden mukaisesti kliinistä vaakaa, jossa on stadiometri (Básculas Nuevo León®, Meksiko), jonka painokapasiteetti on 200 kg. Tasapainoa kalibroidaan päivittäin koko opiskelijoiden rekrytoinnin ajan. BMI lasketaan meksikolaisen standardin NOM-043-SSA2-2011 (2012) mukaisesti. Lantion ja vyötärön ympärysmittojen mittaamiseen käytetään millimetrisiä venymättömiä lasikuituteippejä, joiden pituus on 1,80 m ja leveys 1 cm (Vitamex® Mexico). Tämän alueen väestölle toivottu lonkkamitta naisilla on 80 cm ja miehillä 90 cm (WHO, 2011). Vyötärö/lantio-suhde (WHR) lasketaan jakamalla vyötärön ympärysmitta lantion ympärysmitalla, jossa arvoa 0,85 naisilla ja 0,90 miehillä pidetään raja-arvoina (He et al., 2009). Vyötärö-pituussuhde (WHtR) lasketaan jakamalla vyötärön mitta pituudella, jossa arvoa alle 0,5 pidetään toivottavana (WHO, 2011).

Biokemialliset parametrit. UJATin kliinisen analyysilaboratorion henkilökunta hankkii osallistujilta verinäytteet 12 tunnin paaston jälkeen. Käytetään steriilejä laitteita ja veri kerätään Vacutainer® Serum -putkiin (BectonDickinson, Franklin Lakes, New Jersey, USA). Glukoosi (GPA), triglyseridit (TG) ja kokonaiskolesteroli (TC) mitataan kuivalla analyyttisellä menetelmällä automatisoidussa VITROS® 250 -laitteistossa (Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson, Rochester, NY, USA). samoja laitteita käytetään maksan toimintakokeiden, albumiinin, globuliinien, alkalisen fosfataasin, maitohappodehydrogenaasin, aspartaattiaminotransferaasin, alaniiniaminotransferaasin suorittamiseen.

Glykosyloitu hemoglobiini. Käytetään Glycohemoglobin Pre-Fil of StanbioLab® -reagenssipakkausta (Boerne, Texas, USA). Jokaisen standardin ja näytteen absorbanssialue lasketaan valmistajan toimittaman kaavan mukaan. Muuntokerrointa käytetään ja tulokset raportoidaan muodossa HbA1c. Arvoja 4,2 % ja 6,2 % välillä pidetään normaaleina.

mikroRNA:n määritys. MiRNA:n määrittämiseen käytetään Quiagenin® reagenssisarjoja. RNA:n saamiseksi käytetään miRNeasly Serum/Plasma -sarjaa. Kun RNA on puhdistettu verinäytteistä, suoritetaan oligo-T-retrotranskriptaasireaktio käyttämällä miScript II RT -kittiä ja miScript HiSpec -puskuria. Myöhemmin kiinnostuksen kohteena olevan miARN:n amplifikaatio tehdään reaaliaikaisessa lämpösyklilaitteessa miScript miRNA-polymeraasiketjureaktion (PCR) Array Human Diabetes -sarjan avulla. Amplikonien visualisoimiseksi tutkijat käyttävät miScript SYBR Green PCR -sarjaa. Tulokset arvioidaan reaaliaikaisen lämpösyklilaitteen ohjelmistolla transkriptiotasojen erojen mittaamiseksi. Lämpösyklilaite analysoi valitun miARN:n signaalien lisäykset-vähennykset: miR-320, miR-33a/b, miR-145, miR-335 ja miR-124a. Käytetään Quiagenin® miScript Primer Assayta. Monistusreaktioiden kontrolleina tutkijat käyttävät mi-rtc:tä retrotranskriptaasin tehokkuuden kontrollina ja mir-3p:tä C. elegansista PCR-kontrollina.

Tilastollinen analyysi. Tietojen käsittelyssä käytetään Statistics Package for the Social Sciences (SPSS, Chicago, Illinois, USA) versiota 21.0. Tietojen analysointiin käytetään kuvaavia tilastoja, joissa on keskeinen suuntaus, sekä ehdollisuustaulukoita. Mukana olevien näytteiden testiä käytetään vertailemaan muuttujia ryhmissä biokemiallisten markkerien ja osallistujien sukupuolen mukaan, Pearsonin korrelaatiotestillä myös vertaillaan muuttujia ryhmien ja sukupuolen välillä. Tilastollinen merkitsevyys asetetaan arvoon p ≤ 0,05.

Eettiset näkökohdat. Tutkimus toimitettiin hyväksyttäväksi DACS:n tutkimus- ja eettisille komiteoille, jotka rekisteröitiin Universidad Juárez Autónoma de Tabascon tutkimusosastolla, koodi UJAT-DACS-2015-IA-08. Tutkimus on Maailman lääkäriliiton Helsingin julistuksen mukainen. Suunnittelu on Meksikon terveystutkimuksen yleisen lain säännösten mukainen.