Влияние потребления пищи на микроРНК, связанные с метаболическим синдромом (EFCMRNAMS)

Дизайн исследования. Это рандомизированное исследование. Студенты-первокурсники Автономного университета Хуареса в Табаско (UJAT) проходят клинические лабораторные тесты в рамках процесса зачисления в университет. К участию будут приглашены 50 женщин, поскольку в DACS преобладают женщины. Образцы крови будут взяты для клинического и молекулярного анализа в начале и в конце протокола (три месяца). Антропометрические измерения будут проводиться также в начале и в конце исследования. В течение 3 месяцев блюдо, содержащее традиционные продукты, будет предоставляться 5 дней в неделю. Пища будет содержать в среднем 600 ккал, ≤ 50 мг холестерина, ≥ 10 г клетчатки, ≥ 130 г овощей и ≤ 200 мг натрия. Каждое блюдо будет сопровождаться 3 кукурузными лепешками стандартного размера. Контрольная группа будет получать обычно потребляемый фаст-фуд, предоставляемый столовой кампуса, с аналогичной калорийностью (Muñoz et al., в печати).

Антропометрия. Для определения индекса массы тела (ИМТ) согласно рекомендациям Всемирной организации здравоохранения (2011 г.) будут использоваться клинические весы с ростомером (Básculas Nuevo León®, Мексика) грузоподъемностью 200 кг. Баланс будет калиброваться ежедневно в течение всего времени набора студентов. ИМТ будет рассчитываться в соответствии с мексиканским стандартом NOM-043-SSA2-2011 (2012 г.). Для измерения окружности бедер и талии будут использоваться миллиметровые нерастяжимые ленты из стекловолокна длиной 1,80 м и шириной 1 см (Vitamex® Mexico). Для населения этого региона желательный размер бедер для женщин составляет 80 см, а для мужчин – 90 см (ВОЗ, 2011). Соотношение талия/бедра (WHR) рассчитывается путем деления окружности талии на окружность бедер, где пороговыми значениями считаются значения 0,85 для женщин и 0,90 для мужчин (He et al., 2009). Отношение окружности талии к росту (WHtR) рассчитывается путем деления окружности талии на величину роста, при этом желательным считается значение ниже 0,5 (ВОЗ, 2011 г.).

Биохимические показатели. Образцы крови участников будут взяты персоналом лаборатории клинических анализов UJAT после 12-часового голодания. Будет использоваться стерильное оборудование, и кровь будет собираться в пробирки для сыворотки Vacutainer® (BectonDickinson, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США). Глюкоза (GPA), триглицериды (TG) и общий холестерин (TC) будут измеряться с помощью сухой аналитической методики на автоматизированном оборудовании VITROS® 250 (Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson, Rochester, NY, USA). то же оборудование будет использоваться для выполнения тестов функции печени, альбуминов, глобулинов, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы, аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы.

Гликозилированный гемоглобин. Будет использоваться набор реагентов Glycohemoglobin Pre-Fil of StanbioLab® (Boerne, Texas, USA). Для каждого стандарта и образца диапазон поглощения будет рассчитываться в соответствии с формулой, предоставленной производителем. Будет использоваться коэффициент преобразования, и результаты будут представлены как HbA1c. Нормальными считаются значения от 4,2% до 6,2%.

определение микроРНК. Для определения микроРНК будут использоваться наборы реагентов Quiagen®. Набор miRNeasly Serum/Plasma будет использоваться для получения РНК. После того как РНК будет очищена из образцов крови, будет проведена ретротранскриптазная реакция олиго-Т с использованием набора miScript II RT и буфера miScript HiSpec. После этого амплификация интересующего miARN будет производиться в термоциклере в режиме реального времени с набором MiScript miRNA полимеразной цепной реакции (ПЦР) Array Human Diabetes. Для визуализации ампликонов исследователи будут использовать набор miScript SYBR Green PCR. Результаты будут оцениваться с помощью программного обеспечения термоциклера в реальном времени для измерения различий в уровнях транскрипции. Термоциклер будет анализировать увеличение-уменьшение сигналов выбранных miARN: miR-320, miR-33a/b, miR-145, miR-335 и miR-124a. Будет использоваться анализ праймеров miScript от Quiagen®. В качестве контроля реакций амплификации исследователи будут использовать mi-rtc в качестве контроля эффективности ретротранскриптазы и mir-3p из C. elegans в качестве контроля ПЦР.

Статистический анализ. Для обработки данных будет использоваться Статистический пакет для социальных наук версии 21.0 (SPSS, Чикаго, Иллинойс, США). Для анализа данных будут использоваться описательная статистика с центральной тенденцией, а также таблицы непредвиденных обстоятельств. Тест для связанных выборок будет использоваться для сравнения переменных в группах по биохимическим маркерам и полу участников, корреляционный тест Пирсона также будет использоваться для сравнения переменных между группами и полом. Статистическая значимость будет установлена ​​на уровне p ≤ 0,05.

Этические соображения. Исследование было представлено на утверждение комитетам по исследованиям и этике DACS для регистрации в Исследовательском отделе Автономного университета Хуареса в Табаско, код UJAT-DACS-2015-IA-08. Исследование соответствует Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации. Дизайн соответствует положениям, содержащимся в Общем законе о медицинских исследованиях Мексики.