Auswirkung der Nahrungsaufnahme auf microRNA im Zusammenhang mit dem metabolischen Syndrom (EFCMRNAMS)

Studiendesign. Dies ist eine randomisierte Studie. Studienanfänger an der Universidad Juárez Autónoma de Tabasco (UJAT) werden im Rahmen ihres Immatrikulationsverfahrens an der Universität klinischen Labortests unterzogen. 50 Frauen werden zur Teilnahme eingeladen, da bei DACS überwiegend Frauen eingeschrieben sind. Zu Beginn und am Ende des Protokolls (drei Monate) werden Blutproben für klinische und molekulare Analysen entnommen. Anthropometrische Messungen werden auch zu Beginn und am Ende der Studie durchgeführt. Während der 3 Monate wird an 5 Tagen pro Woche ein Gericht mit traditionellen Speisen angeboten. Das Futter enthält durchschnittlich 600 Kcal, ≤ 50 mg Cholesterin, ≥ 10 g Ballaststoffe, ≥ 130 g Gemüse und ≤ 200 mg Natrium. Jedes Gericht wird mit 3 Maistortillas in Standardgröße serviert. Die Kontrollgruppe erhält gewöhnlich konsumiertes Fast Food, das von der Cafeteria des Campus in einem ähnlichen Kalorienverhältnis bereitgestellt wird (Muñoz et al., im Druck).

Anthropometrie. Zur Bestimmung des Body-Mass-Index (BMI) wird gemäß den Richtlinien der Weltgesundheitsorganisation (2011) eine klinische Waage mit Stadiometer (Básculas Nuevo León®, Mexiko) mit einer Wägekapazität von 200 kg verwendet. Die Waage wird während der gesamten Zeit der Rekrutierung täglich kalibriert. Der BMI wird nach dem mexikanischen Standard NOM-043-SSA2-2011 (2012) berechnet. Zur Messung des Hüft- und Taillenumfangs werden millimetergenaue, nicht dehnbare Glasfaserbänder mit einer Länge von 1,80 m und einer Breite von 1 cm (Vitamex® Mexico) verwendet. Für die Bevölkerung dieser Region liegt der wünschenswerte Hüftumfang für Frauen bei 80 cm und für Männer bei 90 cm (WHO, 2011). Die Waist-Hip-Ratio (WHR) wird berechnet, indem der Taillenumfang durch den Hüftumfang geteilt wird, wobei ein Wert von 0,85 für Frauen und von 0,90 für Männer als Grenzwerte gelten (He et al., 2009). Das Waist-to-Height-Ratio (WHtR) wird berechnet, indem der Taillenumfang durch die Körpergröße geteilt wird, wobei ein Wert unter 0,5 als wünschenswert angesehen wird (WHO, 2011).

Biochemische Parameter. Blutproben von den Teilnehmern werden nach einer 12-stündigen Fastenperiode vom Personal des Labors für klinische Analysen von UJAT beschafft. Es werden sterile Geräte verwendet und Blut wird in Vacutainer®-Serumröhrchen (BectonDickinson, Franklin Lakes, New Jersey, USA) gesammelt. Glukose (GPA), Triglyceride (TG) und Gesamtcholesterin (TC) werden mittels einer trockenen analytischen Methodik in einer automatisierten Ausrüstung VITROS® 250 (Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson, Rochester, NY, USA) gemessen Dieselbe Ausrüstung wird verwendet, um Leberfunktionstests, Albumin, Globuline, alkalische Phosphatase, Milchdehydrogenase, Aspartataminotransferase, Alaninaminotransferase durchzuführen.

Glykosyliertes Hämoglobin. Es wird das Glykohämoglobin-Pre-Fil des Reagenzienkits von StanbioLab® (Boerne, Texas, USA) verwendet. Für jeden Standard und jede Probe wird der Extinktionsbereich gemäß der vom Hersteller bereitgestellten Formel berechnet. Der Umrechnungsfaktor wird verwendet und die Ergebnisse werden als HbA1c angegeben. Als normal gelten Werte zwischen 4,2 % und 6,2 %.

microRNA-Bestimmung. Für die Bestimmung von miRNA werden die Reagenzienkits von Quiagen® verwendet. Zur Gewinnung der RNA wird das Kit miRNeasly Serum/Plasma verwendet. Nachdem die RNA aus den Blutproben gereinigt wurde, wird die Oligo-T-Retrotranskriptase-Reaktion mit dem miScript II RT-Kit und dem Puffer miScript HiSpec durchgeführt. Anschließend erfolgt die Amplifikation des interessierenden miARN in einem Echtzeit-Thermocycler mit dem miScript miRNA Polimerase Chain Reaction (PCR) Array Human Diabetes Kit. Zur Visualisierung von Amplikons verwenden die Prüfärzte das miScript SYBR Green PCR-Kit. Die Ergebnisse werden mit der Software des Echtzeit-Thermocyclers bewertet, um Unterschiede in den Transkriptionsniveaus zu messen. Der Thermocycler analysiert die Inkremente-Dekremente in den Signalen des ausgewählten miARN: miR-320, miR-33a/b, miR-145, miR-335 und miR-124a. Es wird der miScript Primer Assay von Quiagen® verwendet. Als Kontrollen der Amplifikationsreaktionen verwenden die Forscher mi-rtc als Kontrolle der Effizienz der Retrotranskriptase und mir-3p aus C. elegans als PCR-Kontrolle.

Statistische Analyse. Für die Datenverarbeitung wird die Version 21.0 des Statistics Package for the Social Sciences (SPSS, Chicago, Illinois, USA) verwendet. Zur Datenanalyse werden deskriptive Statistiken mit zentraler Tendenz sowie Kontingenztabellen verwendet. Der Test für verwandte Proben wird verwendet, um Variablen in den Gruppen zu vergleichen, entsprechend den biochemischen Markern und dem Geschlecht der Teilnehmer, Pearsons Korrelationstest wird auch verwendet, um Variablen zwischen Gruppen und Geschlecht zu vergleichen. Die statistische Signifikanz wird auf p ≤ 0,05 festgelegt.

Ethische Überlegungen. Die Studie wurde den Forschungs- und Ethikkommissionen der DACS zur Genehmigung vorgelegt, um bei der Forschungsabteilung der Universidad Juárez Autónoma de Tabasco, Code UJAT-DACS-2015-IA-08, registriert zu werden. Die Studie entspricht der Deklaration von Helsinki des Weltärztebundes. Das Design entspricht den Bestimmungen des General Law on Health Research of Mexico.