Effetto del consumo di cibo sul microRNA correlato alla sindrome metabolica (EFCMRNAMS)

Progettazione dello studio. Questo è uno studio randomizzato. Gli studenti matricole dell'Universidad Juárez Autónoma de Tabasco (UJAT) sono sottoposti a test clinici di laboratorio come parte del loro processo di iscrizione all'Università. Cinquanta donne saranno invitate a partecipare, perché le iscrizioni al DACS sono prevalentemente femminili. I campioni di sangue saranno prelevati per le analisi cliniche e molecolari all'inizio e alla fine del protocollo (tre mesi). Misure antropometriche saranno effettuate anche all'inizio e alla fine dello studio. Durante i 3 mesi, verrà fornito un piatto contenente cibo tradizionale 5 giorni a settimana. Il cibo conterrà in media 600 Kcal, ≤ 50 mg di colesterolo, ≥ 10 g di fibre, ≥ 130 g di verdure e ≤ 200 mg di sodio. Ogni piatto sarà accompagnato da 3 tortillas di mais di dimensioni standard. Il gruppo di controllo riceverà fast food abitualmente consumato fornito dalla mensa del campus con una proporzione calorica simile (Muñoz et al., in corso di stampa)

Antropometrici. Per determinare l'indice di massa corporea (BMI), secondo le linee guida dell'Organizzazione Mondiale della Sanità (2011), verrà utilizzata una bilancia clinica con uno stadiometro (Básculas Nuevo León®, Messico) con una capacità di pesatura di 200 kg. Il saldo sarà calibrato giornalmente durante tutto il periodo di reclutamento degli studenti. Il BMI sarà calcolato secondo lo standard messicano NOM-043-SSA2-2011 (2012). Per misurare i perimetri fianchi e vita verranno utilizzati nastri in fibra di vetro non estensibili millimetrici, con una lunghezza di 1,80 me una larghezza di 1 cm (Vitamex® Mexico). Per la popolazione di questa regione, la misura dell'anca desiderabile per le donne è di 80 cm e di 90 cm per gli uomini (WHO, 2011). Il rapporto vita/fianchi (WHR) è calcolato dividendo il perimetro vita per il perimetro fianchi, dove un valore di 0.85 per le donne e di 0.90 per gli uomini sono considerati i limiti di cut-off (He et al., 2009). Il rapporto vita-altezza (WHtR) è calcolato dividendo la misura della vita per quella dell'altezza, dove è considerato auspicabile un valore inferiore a 0,5 (WHO, 2011).

Parametri biochimici. I campioni di sangue dei partecipanti saranno prelevati dal personale del laboratorio di analisi cliniche dell'UJAT dopo un periodo di digiuno di 12 ore. Verranno utilizzate attrezzature sterili e il sangue verrà raccolto in provette Vacutainer® Serum (BectonDickinson, Franklin Lakes, New Jersey, USA). Il glucosio (GPA), i trigliceridi (TG) e il colesterolo totale (TC) saranno misurati mediante una metodologia analitica a secco in un'apparecchiatura automatizzata VITROS® 250 (Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson, Rochester, NY, USA). stessa apparecchiatura verrà utilizzata per eseguire i test di funzionalità epatica, albumina, globuline, fosfatasi alcalina, lattico deidrogenasi, aspartato aminotransferasi, alanina aminotransferasi.

Emoglobina glicosilata. Verrà utilizzato il kit di reagenti Glycohemoglobin Pre-Fil di StanbioLab® (Boerne, Texas, USA). Per ogni standard e campione, l'intervallo di assorbanza sarà calcolato secondo la formula fornita dal produttore. Verrà utilizzato il fattore di conversione e i risultati verranno riportati come HbA1c. Valori compresi tra 4,2% e 6,2% saranno considerati normali.

determinazione del microRNA. Per la determinazione dei miRNA verranno utilizzati i kit di reagenti di Quiagen®. Il kit miRNeasly Serum/Plasma sarà utilizzato per ottenere l'RNA. Una volta che l'RNA è stato purificato dai campioni di sangue, la reazione di oligo T retrotranscriptase verrà eseguita utilizzando il kit miScript II RT e il tampone miScript HiSpec. Successivamente, l'amplificazione del miARN di interesse sarà effettuata in un termociclatore in tempo reale con il kit miScript miRNA per la reazione a catena della polimerasi (PCR) Array Human Diabetes. Per visualizzare gli ampliconi, i ricercatori utilizzeranno il kit miScript SYBR Green PCR. I risultati saranno valutati con il software del termociclatore in tempo reale per misurare le differenze nei livelli di trascrizione. Il termociclatore analizzerà gli incrementi-decrementi nei segnali del miARN selezionato: miR-320, miR-33a/b, miR-145, miR-335 e miR-124a. Verrà utilizzato il miScript Primer Assay di Quiagen®. Come controlli delle reazioni di amplificazione, i ricercatori useranno mi-rtc come controllo dell'efficienza della retrotrascrittasi e mir-3p da C. elegans come controllo PCR.

Analisi statistica. Per il trattamento dei dati verrà utilizzata la versione 21.0 dello Statistics Package for the Social Sciences (SPSS, Chicago, Illinois, USA). Per l'analisi dei dati verranno utilizzate statistiche descrittive con tendenza centrale e tabelle di contingenza. Il test per campioni correlati verrà utilizzato per confrontare le variabili nei gruppi, in base ai marcatori biochimici e al sesso dei partecipanti, il test di correlazione di Pearson verrà utilizzato anche per confrontare le variabili tra gruppi e sesso. La significatività statistica sarà fissata a p ≤ 0,05.

Considerazioni etiche. Lo studio è stato sottoposto all'approvazione dei Comitati di Ricerca ed Etica del DACS per essere registrato presso la Divisione di Ricerca dell'Universidad Juárez Autónoma de Tabasco, codice UJAT-DACS-2015-IA-08. Lo studio è conforme alla Dichiarazione di Helsinki della World Medical Association. Il design è conforme alle norme contenute nella Legge Generale sulla Ricerca Sanitaria del Messico.