Efeito do consumo de alimentos no microRNA relacionado à síndrome metabólica (EFCMRNAMS)

Design de estudo. Este é um estudo randomizado. Os alunos calouros da Universidad Juárez Autónoma de Tabasco (UJAT) são submetidos a testes de laboratório clínico como parte de seu processo de matrícula na Universidade. Cinquenta mulheres serão convidadas a participar, pois o cadastro no DACS é predominantemente feminino. Amostras de sangue serão coletadas para análises clínicas e moleculares no início e no final do protocolo (três meses). As medidas antropométricas serão tomadas também no início e no final do estudo. Durante os 3 meses será fornecido um prato de comida tradicional 5 dias por semana. A alimentação conterá em média 600 Kcal, ≤ 50 mg de colesterol, ≥ 10 g de fibras, ≥ 130 g de vegetais e ≤ de 200 mg de sódio. Cada prato será acompanhado por 3 tortillas de milho de tamanho padrão. O grupo de controle receberá fast food consumido habitualmente fornecido pelo refeitório do campus em uma proporção calórica semelhante (Muñoz et al., no prelo)

Antropometria. Para determinação do índice de massa corporal (IMC), segundo as diretrizes da Organização Mundial da Saúde (2011), será utilizada uma balança clínica com estadiômetro (Básculas Nuevo León®, México) com capacidade de pesagem de 200 kg. A balança será calibrada diariamente durante todo o período de recrutamento dos alunos. O IMC será calculado de acordo com a norma mexicana NOM-043-SSA2-2011 (2012). Para medir os perímetros do quadril e da cintura, serão utilizadas fitas milimétricas de fibra de vidro inextensível, com comprimento de 1,80 m e largura de 1 cm (Vitamex® Mexico). Para a população dessa região, a medida desejável do quadril para mulheres é de 80 cm e de 90 cm para homens (OMS, 2011). A relação cintura/quadril (RCQ) é calculada dividindo-se o perímetro da cintura pelo perímetro do quadril, sendo considerados limites de corte o valor de 0,85 para mulheres e de 0,90 para homens (He et al., 2009). A relação cintura-altura (RCEst) é calculada dividindo-se a medida da cintura pela altura, sendo considerado desejável um valor inferior a 0,5 (OMS, 2011).

Parâmetros bioquímicos. Amostras de sangue dos participantes serão obtidas por pessoal do laboratório de análises clínicas da UJAT após jejum de 12 horas. Será utilizado equipamento estéril e o sangue será coletado em tubos Vacutainer® Serum (Becton Dickinson, Franklin Lakes, New Jersey, EUA). Glicose (GPA), triglicerídeos (TG) e colesterol total (CT) serão medidos por meio de metodologia analítica a seco em equipamento automatizado VITROS® 250 (Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson, Rochester, NY, EUA). mesmo equipamento será utilizado para realizar testes de função hepática, albumina, globulinas, fosfatase alcalina, desidrogenase láctica, aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase.

Hemoglobina glicosilada. Será utilizado o kit de reagentes Glycohemoglobin Pre-Fil da StanbioLab® (Boerne, Texas, EUA). Para cada padrão e amostra, a faixa de absorbância será calculada de acordo com a fórmula fornecida pelo fabricante. O fator de conversão será usado e os resultados serão relatados como HbA1c. Valores entre 4,2% e 6,2% serão considerados normais.

determinação de microRNA. Para a determinação de miRNA, serão utilizados os kits de reagentes da Quiagen®. O kit miRNeasly Serum/Plasma será utilizado para obtenção do RNA. Uma vez que o RNA tenha sido purificado das amostras de sangue, a reação de oligo T retrotranscriptase será realizada usando o kit miScript II RT e o tampão miScript HiSpec. Posteriormente, será feita a amplificação do miARN de interesse em um termociclador em tempo real com o kit miScript miRNA polimerase chain response (PCR) Array Human Diabetes. Para visualizar amplicons, os investigadores usarão o kit miScript SYBR Green PCR. Os resultados serão avaliados com o software do termociclador em tempo real para medir as diferenças nos níveis de transcrição. O termociclador analisará os incrementos-decrementos nos sinais do miARN selecionado: miR-320, miR-33a/b, miR-145, miR-335 e miR-124a. Será utilizado o miScript Primer Assay da Quiagen®. Como controles das reações de amplificação, os pesquisadores utilizarão mi-rtc como controle da eficiência da retrotranscriptase e mir-3p de C. elegans como controle de PCR.

Análise estatística. Para o processamento dos dados, será utilizada a versão 21.0 do Statistics Package for the Social Sciences (SPSS, Chicago, Illinois, EUA). Para análise dos dados, serão utilizadas estatísticas descritivas com tendência central, bem como tabelas de contingência. O teste de amostras relacionadas será utilizado para comparar variáveis ​​nos grupos, segundo marcadores bioquímicos e sexo dos participantes, o teste de correlação de Pearson também será utilizado para comparar variáveis ​​entre grupos e gênero. A significância estatística será estabelecida em p ≤ 0,05.

Considerações éticas. O estudo foi submetido à aprovação dos Comitês de Pesquisa e Ética do DACS para ser registrado na Divisão de Pesquisa da Universidad Juárez Autónoma de Tabasco, código UJAT-DACS-2015-IA-08. O estudo está em conformidade com a Declaração de Helsinque da Associação Médica Mundial. O design está em conformidade com os regulamentos contidos na Lei Geral de Pesquisa em Saúde do México.