Vliv nízkoúrovňové laserové terapie na endometriální buňky: studie in vitro (LLLT)

Plán práce:

Od 40 neplodných žen navštěvujících kliniku pro léčbu neplodnosti v Národním výzkumném centru bude odebráno 40 vzorků lidské endometria (každý vzorek bude rozdělen na 3 kultivační misky; skupina s jednou expozicí, skupina s vícenásobnou expozicí a kontrolní skupina) a budou zařazeny do studie.

Každý vzorek lidského endometria bude rozdělen do 3 misek, aby se vytvořily 3 hlavní skupiny po 40 kultivačních miskách pro jednu skupinu vystavenou laseru versus 40 kultivačních miskách pro skupinu vystavenou více laseru a 40 miskách pro tkáňové kultury pro kontrolní vzorky, tedy celkem 120 budou studovány destičky pro tkáňové kultury, studijní skupiny budou vystaveny nízkoúrovňové laserové terapii a porovnány s jejich odpovídajícími kontrolami.

Načasování odběru vzorku endometriální tkáně:

Biopsie endometriální tkáně bude provedena v časné proliferační fázi těsně po ukončení menstruace (od 5. do 8. dne).

Souhlas Před zákrokem bude od každé ženy získán písemný informovaný souhlas. Souhlas vysvětlí účel postupu, cíl výzkumu a možné vedlejší účinky.

Buněčná kultura endometria:

Od žen zařazených do studie budou odebrány proužky endometriální biopsie. Proužky endometriální biopsie budou odebrány ze stěny dělohy pomocí pipely.

Endometriální tkáň bude transportována do laboratoře v izolačním médiu. Endometriální tkáň bude skladována při 4 °C a zpracována během 2-10 hodin.

Shluky buněk budou považovány za kolonie, když se stanou makroskopicky viditelné a obsahují více než 50 buněk.

Stejné podmínky kultivace budou aplikovány na studijní i kontrolní vzorky. Tkáňová kultura bude zlikvidována po 14 dnech, kdy bude studie dokončena.

Nízkoúrovňová laserová terapie bude diodový laser o vlnové délce 635nm, výkon 40mw bude testován na kultivovaných endometriálních buňkách v Petriho misce S.A. o velikosti 9,62 cm2 s rychlostí fluence 4,2 J/cm2 v kontinuálním režimu, hloubka průniku při 635nm se pohybuje od 1 do 6 mm.

Tkáňové kultury ve studijní skupině budou rozděleny do 2 skupin; 1. skupina bude složena ze 40 destiček pro tkáňové kultury a bude vystavena celkové dávce fluence 4,2 J/cm2 v jediném sezení po dobu 16 minut s nízkoúrovňovým terapeutickým přístrojem nastaveným na výkon 40 mw. 2. skupina bude složena z dalších 40 destiček pro tkáňové kultury, budou vystaveny stejné rychlosti fluence, ale ve více sezeních ''3 sezeních'', která se budou provádět každý druhý den, bude každé sezení trvat přibližně 5,34 minuty za použití nízkoúrovňový laser o výkonu 40 mw pro dosažení stejné dávky fluence 4,2 J/cm2 po ukončení 3. sezení.

Jednorázové versus vícenásobné expozice LLLT budou testovány na endometriálních kultivačních plotnách a budou porovnány s kontrolní skupinou, která nebyla vystavena laseru. Porovnání mezi expozicí jedné relaci a expozicí více relací je důležité pro stanovení přínosů oproti riziku vícenásobných expozic v tenkém endometriu in vivo, protože jde o invazivní postup a vyžaduje zavedení fibrooptické sondy do dělohy, což může způsobit nepohodlí pro pacienta a mohlo by být ovlivněno pacientovou poddajností.

Technika a kroky analýzy RT-PCR:

Real time PCR bude použita pro screening a detekci přítomnosti endometriálních implantačních markerů, konkrétně exprese Integrinu aVB3 "alfa v B3", MUC-1, LIF a také exprese tumor supresorového genu PTEN jako časného markeru premaligního onemocnění endometria .

Elektronová mikroskopie; Buňky v tkáňové kultuře budou vyšetřeny elektronovým mikroskopem za účelem detekce přítomnosti pinopodů jako markeru zvýšené vnímavosti endometria.