Effetto della terapia laser a basso livello sulle cellule endometriali: uno studio in vitro (LLLT)

Piano di lavoro:

Un numero di 40 campioni di endometrio umano saranno raccolti da 40 donne infertili che frequentano la clinica dell'infertilità presso il Centro Nazionale delle Ricerche (ogni campione sarà suddiviso in 3 piastre di coltura; gruppo di esposizione singola, gruppo di esposizione multipla e gruppo di controllo) e sarà incluso in lo studio.

Ogni campione di endometrio umano sarà diviso in 3 piastre, al fine di stabilire 3 gruppi principali di 40 piastre di coltura per il gruppo di esposizione laser singola contro 40 piastre di coltura per il gruppo di esposizione laser multipla e 40 piastre di coltura tissutale per i campioni di controllo, quindi un totale di 120 verranno studiate piastre di coltura tissutale, i gruppi di studio saranno esposti a terapia laser a basso livello e confrontati con i loro controlli appaiati.

Tempistica del campione di tessuto endometriale:

La biopsia del tessuto endometriale verrà eseguita nella prima fase proliferativa subito dopo la cessazione delle mestruazioni (dal giorno 5 al giorno 8).

Consenso Un consenso informato scritto sarà ottenuto da ogni donna prima della procedura. Il consenso spiegherà lo scopo della procedura, lo scopo della ricerca e gli eventuali effetti collaterali.

Coltura cellulare endometriale:

Le strisce per biopsia endometriale saranno raccolte da donne incluse nello studio. Le strisce bioptiche endometriali verranno prelevate dalla parete uterina mediante pipelle.

Il tessuto endometriale sarà trasportato al laboratorio in terreno di isolamento. Il tessuto endometriale sarà conservato a 4°C e processato entro 2-10 h.

I cluster di cellule saranno considerati colonie quando diventano visibili macroscopicamente e contengono più di 50 cellule.

La stessa condizione di coltura verrà applicata sia ai campioni di studio che a quelli di controllo. La coltura tissutale verrà scartata dopo 14 giorni quando lo studio sarà completato.

La terapia laser a basso livello sarà un laser a diodi a lunghezza d'onda di 635 nm, la potenza di 40 mw sarà testata su cellule endometriali in coltura in una capsula di Petri S.A. di 9,62 cm2 con un tasso di fluenza di 4,2 J/cm2 in modalità continua, la profondità di penetrazione a 635 nm varia da 1 a 6 mm.

Le colture tissutali nel gruppo di studio saranno divise in 2 gruppi; Il 1° gruppo sarà composto da 40 piastre di coltura tissutale e sarà esposto alla dose di fluenza totale di 4,2 J/cm2 in un'unica sessione della durata di 16 minuti con una macchina per terapia a basso livello regolata alla potenza di 40 mw. Il 2° gruppo sarà composto da altre 40 piastre di coltura tissutale, saranno esposte alla stessa velocità di fluenza ma in più sessioni ''3 sessioni'', che verranno eseguite a giorni alterni, ogni sessione durerà per circa 5,34 minuti utilizzando laser a basso livello di potenza di 40 mw per raggiungere la stessa dose di fluenza di 4,2 J/cm2 dopo aver terminato la 3a sessione.

Le esposizioni singole o multiple di LLLT saranno testate nelle piastre di coltura endometriale e saranno confrontate con il gruppo di controllo non esposto al laser. Il confronto tra l'esposizione a una singola sessione e l'esposizione a più sessioni è importante al fine di determinare i benefici rispetto al rischio di sessioni di esposizioni multiple nell'endometrio sottile in vivo, essendo una procedura invasiva e richiedendo l'inserimento di una sonda fibro-ottica all'interno dell'utero che potrebbe causare alcuni disagio per il paziente e potrebbe essere influenzata dalla compliance del paziente.

Tecnica e fasi dell'analisi RT-PCR:

La PCR in tempo reale sarà utilizzata per vagliare e rilevare la presenza di marcatori di impianto endometriale, vale a dire l'espressione dell'integrina aVB3 "alpha v B3", MUC-1, LIF e anche l'espressione del gene oncosoppressore PTEN come marcatore precoce per la malattia endometriale precancerosa .

Microscopio elettronico; Le cellule in coltura tissutale saranno esaminate al microscopio elettronico per rilevare la presenza di pinopode come marcatore di aumentata ricettività endometriale.