Effekt af lavniveau laserterapi på endometrieceller: en in vitro undersøgelse (LLLT)

Arbejdsplan:

Et antal på 40 humane endometrieprøver vil blive indsamlet fra 40 infertile kvinder, der går på infertilitetsklinikken på Det Nationale Forskningscenter (hver prøve vil blive opdelt i 3 dyrkningsplader; enkelteksponeringsgruppe, multipel eksponeringsgruppe og kontrolgruppe) og vil blive inkluderet i Studiet.

Hver human endometrieprøve vil blive opdelt i 3 plader for at etablere 3 hovedgrupper af 40 dyrkningsplader til en enkelt lasereksponeringsgruppe versus 40 dyrkningsplader til multipel lasereksponeringsgruppe og 40 vævskulturplader til kontrolprøver, således i alt 120 vævskulturplader vil blive undersøgt, undersøgelsesgrupperne vil blive udsat for laserterapi på lavt niveau og sammenlignet med deres matchede kontroller.

Timing af endometrievævsprøve:

Endometrievævsbiopsi vil blive udført i den tidlige proliferative fase lige efter menstruationen ophører (fra dag 5 til dag 8).

Samtykke Der vil blive indhentet skriftligt informeret samtykke fra hver kvinde før proceduren. Samtykket vil forklare formålet med proceduren, formålet med forskningen og de mulige bivirkninger.

Endometriecellekultur:

Endometriebiopsistrimler vil blive indsamlet fra kvinder inkluderet i undersøgelsen. Endometriebiopsistrimlerne vil blive taget fra livmodervæggen ved hjælp af pipelle.

Endometrievæv vil blive transporteret til laboratoriet i isoleringsmedier. Endometrievæv vil blive opbevaret ved 4°C og behandlet inden for 2-10 timer.

Klynger af celler vil blive betragtet som kolonier, når de bliver synlige makroskopisk og indeholder mere end 50 celler.

De samme dyrkningsbetingelser vil blive anvendt på både undersøgelses- og kontrolprøver. Vævskulturen kasseres efter 14 dage, når undersøgelsen er afsluttet.

Laserterapi på lavt niveau vil være bølgelængde 635 nm diodelaser, effekt på 40 mw vil blive testet på dyrkede endometrieceller i petriskål S.A. på 9,62 cm2 med fluenshastighed på 4,2 J/cm2 i kontinuerlig tilstand, penetrationsdybde ved 635 nm varierer fra 1 til 1 6 mm.

Vævskulturer i studiegruppen vil blive opdelt i 2 grupper; Den 1. gruppe vil være sammensat af 40 vævskulturplader og vil blive udsat for den samlede fluensdosis på 4,2 J/cm2 i en enkelt session af 16 minutters varighed med lavniveauterapimaskine justeret til en effekt på 40mw. Den 2. gruppe vil være sammensat af yderligere 40 vævskulturplader, de vil blive udsat for den samme fluenshastighed, men i flere sessioner ''3 sessioner'', som vil blive udført hver anden dag, vil hver session vare i cirka 5,34 minutter vha. lavniveaulaser med en effekt på 40mw for at nå den samme fluensdosis på 4,2 J/cm2 efter at have afsluttet den 3. session.

Enkelte versus multiple eksponeringer af LLLT vil blive testet i endometriekulturpladerne og vil blive sammenlignet med kontrolgruppen, der ikke er udsat for laser. Sammenligning mellem eksponering af en enkelt session og eksponering for flere sessioner er vigtig for at bestemme fordelene i forhold til risikoen for sessioner med flere eksponeringer i tyndt endometrium in vivo, da det er en invasiv procedure og kræver indsættelse af en fibro-optisk sonde inde i livmoderen, hvilket kan forårsage nogle ubehag for patienten og kan blive påvirket af patientens compliance.

RT-PCR Analyseteknik og trin:

Real-time PCR vil blive brugt til at screene og detektere tilstedeværelsen af ​​endometrieimplantationsmarkører, nemlig ekspressionen af ​​Integrin aVB3 "alpha v B3", MUC-1, LIF og også ekspressionen af ​​PTEN tumor suppressorgen som en tidlig markør for præmalign endometriesygdom .

Elektronmikroskopi; Celler i vævskultur vil blive undersøgt med elektronmikroskop for at påvise tilstedeværelsen af ​​pinopoder som en markør for øget endometrial modtagelighed.