Wirkung der Low-Level-Lasertherapie auf Endometriumzellen: Eine In-vitro-Studie (LLLT)

Arbeitsplan:

Von 40 unfruchtbaren Frauen, die die Unfruchtbarkeitsklinik am National Research Center aufsuchen, werden 40 menschliche Endometriumproben entnommen (jede Probe wird in 3 Kulturplatten aufgeteilt: Einzelexpositionsgruppe, Mehrfachexpositionsgruppe und Kontrollgruppe) und in die Studie aufgenommen die Studium.

Jede menschliche Endometriumprobe wird in 3 Platten aufgeteilt, um 3 Hauptgruppen von 40 Kulturplatten für die Gruppe mit Einzellaserbelichtung gegenüber 40 Kulturplatten für die Gruppe mit Mehrfachlaserbelichtung und 40 Gewebekulturplatten für Kontrollproben, also insgesamt 120, zu bilden Gewebekulturplatten werden untersucht, die Studiengruppen werden einer Low-Level-Lasertherapie ausgesetzt und mit ihren entsprechenden Kontrollen verglichen.

Zeitpunkt der Endometriumgewebeprobe:

Die Biopsie des Endometriumgewebes wird in der frühen Proliferationsphase unmittelbar nach Ende der Menstruation (vom 5. bis zum 8. Tag) durchgeführt.

Einwilligung Vor dem Eingriff wird von jeder Frau eine schriftliche Einverständniserklärung eingeholt. In der Einwilligung werden der Zweck des Verfahrens, das Ziel der Forschung und die möglichen Nebenwirkungen erläutert.

Endometriumzellkultur:

Von den in die Studie einbezogenen Frauen werden Endometriumbiopsiestreifen entnommen. Die Endometriumbiopsiestreifen werden mit einer Pipelle aus der Gebärmutterwand entnommen.

Endometriumgewebe wird in Isolationsmedien ins Labor transportiert. Endometriumgewebe wird bei 4 °C gelagert und innerhalb von 2–10 Stunden verarbeitet.

Zellcluster gelten als Kolonien, wenn sie makroskopisch sichtbar werden und mehr als 50 Zellen enthalten.

Die gleichen Kulturbedingungen werden sowohl auf die Studien- als auch auf die Kontrollproben angewendet. Die Gewebekultur wird nach 14 Tagen verworfen, wenn die Studie abgeschlossen ist.

Bei der Low-Level-Lasertherapie handelt es sich um einen Diodenlaser mit einer Wellenlänge von 635 nm, eine Leistung von 40 MW wird an kultivierten Endometriumzellen in einer Petrischale S.A. von 9,62 cm2 mit einer Fluenzrate von 4,2 J/cm2 im kontinuierlichen Modus getestet, die Eindringtiefe bei 635 nm reicht von 1 bis 6mm.

Gewebekulturen in der Studiengruppe werden in zwei Gruppen eingeteilt; Die 1. Gruppe besteht aus 40 Gewebekulturplatten und wird in einer einzigen Sitzung von 16 Minuten Dauer mit einem Low-Level-Therapiegerät, das auf eine Leistung von 40 MW eingestellt ist, der Gesamtfluenzdosis von 4,2 J/cm2 ausgesetzt. Die 2. Gruppe besteht aus weiteren 40 Gewebekulturplatten, sie werden der gleichen Fluenzrate ausgesetzt, aber in mehreren Sitzungen „3 Sitzungen“, die jeden zweiten Tag durchgeführt werden, dauert jede Sitzung ungefähr 5,34 Minuten Low-Level-Laser mit einer Leistung von 40 MW, um nach Abschluss der 3. Sitzung die gleiche Fluenzdosis von 4,2 J/cm2 zu erreichen.

Einzelne versus mehrfache LLLT-Expositionen werden in den Endometriumkulturplatten getestet und mit der Kontrollgruppe verglichen, die keinem Laser ausgesetzt war. Der Vergleich zwischen Einzelexpositionssitzungen und Mehrfachexpositionssitzungen ist wichtig, um die Vorteile gegenüber dem Risiko von Mehrfachexpositionssitzungen in dünner Gebärmutterschleimhaut in vivo zu ermitteln, da es sich um ein invasives Verfahren handelt, das die Einführung einer faseroptischen Sonde in die Gebärmutter erfordert, was zu Nebenwirkungen führen kann Dies ist für den Patienten unangenehm und kann durch die Compliance des Patienten beeinträchtigt werden.

Technik und Schritte der RT-PCR-Analyse:

Echtzeit-PCR wird verwendet, um das Vorhandensein von Endometriumimplantationsmarkern zu screenen und nachzuweisen, nämlich die Expression von Integrin aVB3 „alpha v B3“, MUC-1, LIF und auch die Expression des PTEN-Tumorsuppressorgens als Frühmarker für eine prämaligne Endometriumerkrankung .

Elektronenmikroskopie; Zellen in Gewebekulturen werden elektronenmikroskopisch untersucht, um das Vorhandensein von Pinopoden als Marker für eine erhöhte Empfänglichkeit des Endometriums festzustellen.