Matalan tason laserhoidon vaikutus kohdun limakalvon soluihin: In vitro -tutkimus (LLLT)

Työsuunnitelma:

Kansallisen tutkimuskeskuksen lapsettomuusklinikalla 40 lapsettomalta naiselta otetaan 40 ihmisen kohdun limakalvonäytettä (jokainen näyte jaetaan kolmeen viljelylevyyn; yksialtistusryhmä, monialtistusryhmä ja kontrolliryhmä) ja sisällytetään tutkimukseen. tutkimus.

Jokainen ihmisen kohdun limakalvonäyte jaetaan kolmeen levyyn, jotta muodostetaan 3 pääryhmää, joissa on 40 viljelylevyä yhdelle laseraltistusryhmälle, kun taas 40 viljelylevyä usealle laseraltistusryhmälle ja 40 kudosviljelylevyä kontrollinäytteille, eli yhteensä 120 kudosviljelmälevyjä tutkitaan, tutkimusryhmät altistetaan matalatasoiselle laserhoidolle ja verrataan vastaaviin kontrolleihin.

Endometriumkudosnäytteen ottoajankohta:

Kohdun limakalvon kudosbiopsia tehdään varhaisessa proliferatiivisessa vaiheessa juuri kuukautisten päättymisen jälkeen (päivästä 5 päivään 8).

Suostumus Jokaiselta naiselta hankitaan kirjallinen suostumus ennen toimenpidettä. Suostumus selittää toimenpiteen tarkoitus, tutkimuksen tavoite ja mahdolliset sivuvaikutukset.

Endometriumin soluviljelmä:

Endometriumin biopsialiuskat kerätään tutkimukseen osallistuvilta naisilta. Kohdun limakalvon biopsialiuskat otetaan kohdun seinämästä pipelin avulla.

Endometriumkudos kuljetetaan laboratorioon eristysväliaineissa. Endometriumkudosta säilytetään 4 °C:ssa ja prosessoidaan 2–10 tunnin kuluessa.

Soluklustereita pidetään pesäkkeinä, kun ne näkyvät makroskooppisesti ja sisältävät yli 50 solua.

Samoja viljelyolosuhteita sovelletaan sekä tutkimus- että kontrollinäytteisiin. Kudosviljelmä hylätään 14 päivän kuluttua tutkimuksen päätyttyä.

Matalatasoinen laserhoito on aallonpituuden 635 nm diodilaseria, 40 mw:n teho testataan viljellyillä kohdun limakalvon soluilla petrimaljassa S.A., jonka koko on 9,62 cm2 fluenssinopeudella 4,2 J/cm2 jatkuvassa tilassa, tunkeutumissyvyys 635 nm:ssä vaihtelee 1 - 6 mm.

Tutkimusryhmän kudosviljelmät jaetaan 2 ryhmään; Ensimmäinen ryhmä koostuu 40 kudosviljelylevystä ja altistetaan kokonaisfluenssiannokselle 4,2 J/cm2 yhdellä 16 minuuttia kestävällä istunnolla matalan tason hoitokoneella, jonka teho on 40 mw. Toinen ryhmä koostuu 40 toisesta kudosviljelylevystä, ne altistetaan samalle fluenssitaajuudelle, mutta useissa istunnoissa "3 istuntoa", jotka suoritetaan joka toinen päivä, kukin istunto kestää noin 5,34 minuuttia. matalan tason laser teholla 40 mw saavuttaakseen saman 4,2 J/cm2 fluenssiannoksen kolmannen istunnon jälkeen.

Yksittäinen vs. useita altistuksia LLLT:lle testataan kohdun limakalvon viljelylevyillä ja verrataan kontrolliryhmään, joka ei ole altistettu laserille. Yhden käyttökerran altistumisen ja useiden hoitokertojen altistumisen vertailu on tärkeää, jotta voidaan määrittää edut verrattuna useiden altistusistuntojen riskiin ohuessa kohdun limakalvossa in vivo, koska se on invasiivinen toimenpide ja vaatii fibrooptisen anturin asettamisen kohtuun, mikä saattaa aiheuttaa epämukavuutta potilaalle ja siihen voi vaikuttaa potilaan suostumus.

RT-PCR-analyysitekniikka ja vaiheet:

Reaaliaikaista PCR:ää käytetään kohdun limakalvon implantaatiomarkkerien, nimittäin Integrin aVB3 "alpha v B3", MUC-1:n, LIF:n ilmentymisen sekä PTEN-kasvainsuppressorigeenin ilmentymisen seulomiseen ja havaitsemiseen premalignin kohdun limakalvosairauden varhaisena markkerina. .

elektronimikroskopia; Kudosviljelmässä olevia soluja tutkitaan elektronimikroskoopilla pinopodien esiintymisen havaitsemiseksi kohdun limakalvon lisääntyneen vastaanoton merkkiaineena.