Efecto de la terapia con láser de bajo nivel en las células endometriales: un estudio in vitro (LLLT)

Plan de trabajo:

Se recolectarán 40 muestras de endometrio humano de 40 mujeres infértiles que asisten a la clínica de infertilidad del Centro Nacional de Investigación (cada muestra se dividirá en 3 placas de cultivo; grupo de exposición única, grupo de exposición múltiple y grupo de control) y se incluirán en el estudio.

Cada muestra de endometrio humano se dividirá en 3 placas, con el fin de establecer 3 grupos principales de 40 placas de cultivo para el grupo de exposición única a láser frente a 40 placas de cultivo para el grupo de exposición múltiple a láser y 40 placas de cultivo tisular para las muestras de control, por lo que un total de 120 Se estudiarán las placas de cultivo de tejidos, los grupos de estudio se expondrán a una terapia con láser de bajo nivel y se compararán con sus controles emparejados.

Momento de la muestra de tejido endometrial:

La biopsia de tejido endometrial se realizará en la fase proliferativa temprana justo después de que cese la menstruación (del día 5 al día 8).

Consentimiento Se obtendrá un consentimiento informado por escrito de cada mujer antes del procedimiento. El consentimiento explicará el propósito del procedimiento, el objetivo de la investigación y los posibles efectos secundarios.

Cultivo de células endometriales:

Se recolectarán tiras de biopsia endometrial de las mujeres incluidas en el estudio. Las tiras de biopsia endometrial se tomarán de la pared uterina usando una pipeta.

El tejido endometrial se transportará al laboratorio en medios de aislamiento. El tejido endometrial se almacenará a 4 °C y se procesará en un plazo de 2 a 10 h.

Los grupos de células se considerarán colonias cuando sean visibles macroscópicamente y contengan más de 50 células.

Se aplicará la misma condición de cultivo a las muestras de estudio y de control. El cultivo de tejido se descartará a los 14 días cuando se haya completado el estudio.

La terapia con láser de bajo nivel será un láser de diodo de 635 nm de longitud de onda, la potencia de 40 mw se probará en células endometriales cultivadas en placas de Petri S.A. de 9,62 cm2 con una tasa de fluencia de 4,2 J/cm2 en el modo continuo, la profundidad de penetración a 635 nm varía de 1 a 6 mm.

Los cultivos de tejidos en el grupo de estudio se dividirán en 2 grupos; El 1er grupo estará compuesto por 40 placas de cultivo de tejidos y se expondrá a la dosis de fluencia total 4,2 J/cm2 en una sola sesión de 16 minutos de duración con máquina de terapia de bajo nivel ajustada a una potencia de 40mw. El segundo grupo estará compuesto por otras 40 placas de cultivo de tejidos, se expondrán a la misma tasa de fluencia pero en múltiples sesiones ''3 sesiones'', que se realizarán en días alternos, cada sesión tendrá una duración aproximada de 5,34 minutos usando láser de bajo nivel de potencia de 40mw para alcanzar la misma dosis de fluencia de 4,2 J/cm2 al finalizar la 3ª sesión.

Se probarán exposiciones únicas versus múltiples de LLLT en las placas de cultivo endometrial y se compararán con el grupo de control no expuesto al láser. La comparación entre la exposición de una sola sesión y la exposición de múltiples sesiones es importante para determinar los beneficios sobre el riesgo de múltiples sesiones de exposición en endometrio delgado in vivo, ya que es un procedimiento invasivo y requiere la inserción de una sonda fibroóptica dentro del útero que podría causar algunos incomodidad para el paciente y podría verse afectado por el cumplimiento del paciente.

Técnica de análisis RT-PCR y pasos:

Se utilizará PCR en tiempo real para examinar y detectar la presencia de marcadores de implantación endometrial, a saber, la expresión de Integrin aVB3 "alpha v B3", MUC-1, LIF y también la expresión del gen supresor de tumores PTEN como marcador temprano de enfermedad endometrial premaligna. .

Microscopio de electrones; Las células en cultivo tisular se examinarán con un microscopio electrónico para detectar la presencia de pinópodos como marcador del aumento de la receptividad endometrial.