Efeito da terapia a laser de baixa intensidade nas células endometriais: um estudo in vitro (LLLT)

Plano de trabalho:

Um número de 40 amostras endometriais humanas serão coletadas de 40 mulheres inférteis atendidas na clínica de infertilidade do National Research Center (cada amostra será dividida em 3 placas de cultura; grupo de exposição única, grupo de exposição múltipla e grupo controle) e serão incluídas no o estudo.

Cada amostra de endométrio humano será dividida em 3 placas, a fim de estabelecer 3 grupos principais de 40 placas de cultura para grupo de exposição única a laser versus 40 placas de cultura para grupo de exposição múltipla a laser e 40 placas de cultura de tecidos para amostras de controle, totalizando 120 placas de cultura de tecidos serão estudadas, os grupos de estudo serão expostos à terapia a laser de baixa potência e comparados com seus controles correspondentes.

Momento da amostra de tecido endometrial:

A biópsia de tecido endometrial será realizada na fase proliferativa inicial logo após o término da menstruação (do dia 5 ao dia 8).

Consentimento Um consentimento informado por escrito será obtido de cada mulher antes do procedimento. O consentimento explicará o objetivo do procedimento, o objetivo da pesquisa e os possíveis efeitos colaterais.

Cultura de células endometriais:

Tiras de biópsia endometrial serão coletadas de mulheres incluídas no estudo. As tiras de biópsia endometrial serão retiradas da parede uterina usando pipeta.

O tecido endometrial será transportado para o laboratório em meio de isolamento. O tecido endometrial será armazenado a 4°C e processado dentro de 2-10 h.

Aglomerados de células serão considerados colônias quando se tornarem visíveis macroscopicamente e contiverem mais de 50 células.

A mesma condição de cultura será aplicada às amostras de estudo e controle. A cultura de tecidos será descartada após 14 dias, quando o estudo será concluído.

A terapia a laser de baixa potência será laser de diodo de comprimento de onda 635nm, potência de 40mw será testada em células endometriais cultivadas em placa de Petri S.A. de 9,62cm2 com taxa de fluência de 4,2 J/cm2 no modo contínuo, profundidade de penetração em 635nm varia de 1 a 6 mm.

As culturas de tecidos do grupo de estudo serão divididas em 2 grupos; O 1º grupo será composto por 40 placas de cultura de tecidos e será exposto à dose de fluência total 4,2 J/cm2 em sessão única de 16 minutos de duração com aparelho de terapia de baixa intensidade ajustado na potência de 40mw. O 2º grupo será composto por mais 40 placas de cultura de tecidos, serão expostas à mesma taxa de fluência mas em múltiplas sessões ''3 sessões'', que serão realizadas em dias alternados, cada sessão terá a duração aproximada de 5,34 minutos utilizando laser de baixa potência de 40mw para atingir a mesma dose de fluência de 4,2 J/cm2 após terminar a 3ª sessão.

Exposições únicas versus múltiplas de LLLT serão testadas nas placas de cultura endometrial e serão comparadas ao grupo controle não exposto ao laser. A comparação entre a exposição de sessão única e a exposição de múltiplas sessões é importante para determinar os benefícios sobre o risco de sessões de exposições múltiplas em endométrio fino in vivo, sendo um procedimento invasivo e exigindo a inserção de uma sonda de fibro-óptica dentro do útero, o que pode causar alguns desconforto para o paciente e pode ser afetado pela adesão do paciente.

Técnica e etapas de análise de RT-PCR:

A PCR em tempo real será utilizada para rastrear e detetar a presença de marcadores de implantação endometrial nomeadamente a expressão da Integrina aVB3 "alpha v B3", MUC-1, LIF e também a expressão do gene supressor de tumor PTEN como um marcador precoce de doença endometrial pré-maligna .

Microscópio eletrônico; Células em cultura de tecidos serão examinadas por microscopia eletrônica a fim de detectar a presença de pinópodes como marcador de aumento da receptividade endometrial.