Effekt av lågnivålaserterapi på endometrieceller: en in vitro-studie (LLLT)

Arbetsplan:

Ett antal av 40 humana endometrieprover kommer att samlas in från 40 infertila kvinnor som besöker infertilitetskliniken vid National Research Center (varje prov kommer att delas upp i 3 odlingsplattor; enkelexponeringsgrupp, multipelexponeringsgrupp och kontrollgrupp) och kommer att ingå i studien.

Varje humant endometrieprov kommer att delas upp i 3 plattor för att etablera 3 huvudgrupper om 40 odlingsplattor för en enda laserexponeringsgrupp mot 40 odlingsplattor för multipel laserexponeringsgrupp och 40 vävnadsodlingsplattor för kontrollprover, alltså totalt 120 vävnadsodlingsplattor kommer att studeras, studiegrupperna kommer att exponeras för laserterapi på låg nivå och jämföras med deras matchade kontroller.

Tidpunkt för endometrievävnadsprov:

Endometrievävnadsbiopsi kommer att utföras i den tidiga proliferativa fasen precis efter att menstruationen upphört (från dag 5 till dag 8).

Samtycke Ett skriftligt informerat samtycke kommer att erhållas från varje kvinna före ingreppet. Samtycket kommer att förklara syftet med proceduren, syftet med forskningen och möjliga biverkningar.

Endometriecellodling:

Endometriebiopsiremsor kommer att samlas in från kvinnor som ingår i studien. Endometriebiopsiremsorna kommer att tas från livmoderväggen med hjälp av pipelle.

Endometrievävnad kommer att transporteras till laboratoriet i isoleringsmedia. Endometrievävnad förvaras vid 4°C och bearbetas inom 2-10 timmar.

Kluster av celler kommer att betraktas som kolonier när de blir synliga makroskopiskt och innehåller fler än 50 celler.

Samma odlingsvillkor kommer att tillämpas på både studie- och kontrollprover. Vävnadskulturen kommer att kasseras efter 14 dagar när studien kommer att slutföras.

Lågnivålaserterapi kommer att vara våglängd 635nm diodlaser, effekt på 40mw kommer att testas på odlade endometrieceller i Petriskål S.A. på 9,62cm2 med fluenshastighet på 4,2 J/cm2 i kontinuerligt läge, penetrationsdjup vid 635nm sträcker sig från 1 till 1 6 mm.

Vävnadskulturer i studiegruppen kommer att delas in i 2 grupper; Den första gruppen kommer att bestå av 40 vävnadsodlingsplattor och kommer att exponeras för den totala fluensdosen 4,2 J/cm2 i en enda session på 16 minuter med lågnivåterapimaskin justerad till en effekt på 40mw. Den andra gruppen kommer att bestå av ytterligare 40 vävnadsodlingsplattor, de kommer att exponeras för samma fluenshastighet men i flera sessioner ''3 sessioner'', som kommer att utföras varannan dag, kommer varje session att pågå i cirka 5,34 minuter med hjälp av lågnivålaser med effekt på 40mw för att nå samma fluensdos på 4,2 J/cm2 efter avslutad 3:e session.

Enstaka mot flera exponeringar av LLLT kommer att testas i endometrieodlingsplattorna och kommer att jämföras med kontrollgruppen som inte exponerats för laser. Jämförelse mellan exponering för enstaka sessioner och exponering för flera sessioner är viktig för att fastställa fördelarna jämfört med risken för sessioner med flera exponeringar i tunt endometrium in vivo, eftersom det är ett invasivt ingrepp och som kräver införande av en fibrooptisk sond inuti livmodern, vilket kan orsaka vissa obehag för patienten och kan påverkas av patientens följsamhet.

RT-PCR-analysteknik och steg:

Realtids-PCR kommer att användas för att screena och detektera närvaron av endometrieimplantationsmarkörer, nämligen uttrycket av Integrin aVB3 "alpha v B3", MUC-1, LIF och även uttrycket av PTEN-tumörsuppressorgenen som en tidig markör för premaligna endometriesjukdom .

Elektronmikroskopi; Celler i vävnadskultur kommer att undersökas med elektronmikroskop för att upptäcka närvaron av pinopoder som en markör för ökad endometriell mottaglighet.