Effekt av lavnivålaserterapi på endometrieceller: en in vitro-studie (LLLT)

Arbeidsplan:

Et antall på 40 humane endometrieprøver vil bli samlet inn fra 40 infertile kvinner som går på infertilitetsklinikken ved Nasjonalt forskningssenter (hver prøve vil bli delt inn i 3 dyrkningsplater; enkelteksponeringsgruppe, multippeleksponeringsgruppe og kontrollgruppe) og vil inngå i studien.

Hver human endometrieprøve vil bli delt inn i 3 plater, for å etablere 3 hovedgrupper med 40 kulturplater for enkelt lasereksponeringsgruppe mot 40 kulturplater for multippel lasereksponeringsgruppe og 40 vevskulturplater for kontrollprøver, dermed totalt 120 vevskulturplater vil bli studert, studiegruppene vil bli utsatt for laserterapi på lavt nivå og sammenlignet med deres matchede kontroller.

Tidspunkt for endometrievevsprøve:

Endometrievevsbiopsi vil bli utført i den tidlige proliferative fasen like etter at menstruasjonen opphører (fra dag 5 til dag 8).

Samtykke Et skriftlig informert samtykke vil bli innhentet fra hver kvinne før prosedyren. Samtykket vil forklare formålet med prosedyren, målet fra forskningen og mulige bivirkninger.

Endometriecellekultur:

Endometriebiopsistrimler vil bli samlet inn fra kvinner inkludert i studien. Endometriebiopsistrimlene vil bli tatt fra livmorveggen ved hjelp av pipelle.

Endometrievev vil bli transportert til laboratoriet i isolasjonsmedium. Endometrievev vil bli lagret ved 4°C og behandlet innen 2-10 timer.

Klynger av celler vil bli betraktet som kolonier når de blir synlige makroskopisk og inneholder mer enn 50 celler.

Den samme kulturbetingelsen vil bli brukt på både studie- og kontrollprøver. Vevskulturen vil bli kastet etter 14 dager når studien er fullført.

Laserterapi på lavt nivå vil være bølgelengde 635 nm diodelaser, kraft på 40 mw vil bli testet på dyrkede endometrieceller i Petriskål S.A. på 9,62 cm2 med fluenshastighet på 4,2 J/cm2 i kontinuerlig modus, penetrasjonsdybde ved 635 nm varierer fra 1 til 1 6 mm.

Vevskulturer i studiegruppen vil bli delt inn i 2 grupper; Den første gruppen vil være sammensatt av 40 vevskulturplater og vil bli eksponert for den totale fluensdosen 4,2 J/cm2 i en enkelt økt på 16 minutter med lavnivåterapimaskin justert til en effekt på 40mw. Den andre gruppen vil være sammensatt av ytterligere 40 vevskulturplater, de vil bli eksponert for samme fluenshastighet, men i flere økter ''3 økter'', som vil bli utført annenhver dag, vil hver økt vare i ca. 5,34 minutter ved hjelp av lavnivålaser med kraft på 40mw for å nå samme fluensdose på 4,2 J/cm2 etter endt 3. økt.

Enkelt versus multiple eksponeringer av LLLT vil bli testet i endometriekulturplatene og vil bli sammenlignet med kontrollgruppen som ikke er eksponert for laser. Sammenligning mellom eksponering for én økt og eksponering for flere økter er viktig for å bestemme fordelene fremfor risikoen for økter med flere eksponeringer i tynt endometrium in vivo, som er en invasiv prosedyre og krever innsetting av en fibrooptisk sonde inne i livmoren, noe som kan forårsake noen ubehag for pasienten og kan bli påvirket av pasientens etterlevelse.

RT-PCR-analyseteknikk og trinn:

Sanntids-PCR vil bli brukt til å screene og oppdage tilstedeværelsen av endometrieimplantasjonsmarkører, nemlig uttrykket av Integrin aVB3 "alpha v B3", MUC-1, LIF og også uttrykket av PTEN tumor suppressorgen som en tidlig markør for premalign endometrial sykdom .

Elektronmikroskopi; Celler i vevskultur vil bli undersøkt med elektronmikroskop for å oppdage tilstedeværelsen av pinopoder som en markør for økt endometrial mottakelighet.