Wpływ terapii laserowej niskiego poziomu na komórki endometrium: badanie in vitro (LLLT)

Plan pracy:

Zostanie pobranych 40 próbek endometrium ludzkiego od 40 niepłodnych kobiet zgłaszających się do poradni leczenia niepłodności Narodowego Centrum Badań (każda próbka zostanie podzielona na 3 płytki hodowlane; grupa pojedynczej ekspozycji, grupa wielokrotnej ekspozycji i grupa kontrolna) i zostanie włączonych do badania.

Każda próbka ludzkiego endometrium zostanie podzielona na 3 płytki w celu ustalenia 3 głównych grup po 40 płytek hodowlanych dla grupy pojedynczej ekspozycji na działanie lasera w porównaniu z 40 płytkami hodowlanymi dla grupy wielokrotnej ekspozycji na promieniowanie laserowe i 40 płytek hodowlanych dla próbek kontrolnych, co łącznie daje 120 zostaną zbadane płytki do hodowli tkankowych, badane grupy zostaną poddane terapii laserowej o niskim poziomie i porównane z ich dobranymi kontrolami.

Czas pobrania próbki tkanki endometrium:

Biopsja tkanki endometrium zostanie wykonana we wczesnej fazie proliferacyjnej, zaraz po ustaniu miesiączki (od 5 do 8 dnia).

Zgoda Od każdej kobiety przed zabiegiem uzyskana zostanie pisemna świadoma zgoda. W zgodzie zostanie wyjaśniony cel zabiegu, cel badań oraz możliwe skutki uboczne.

Hodowla komórek endometrium:

Od kobiet biorących udział w badaniu zostaną pobrane paski do biopsji endometrium. Paski do biopsji endometrium zostaną pobrane ze ściany macicy za pomocą pipeli.

Tkanka endometrium zostanie przetransportowana do laboratorium w pożywce izolacyjnej. Tkanka endometrium będzie przechowywana w temperaturze 4°C i przetwarzana w ciągu 2-10 godzin.

Skupiska komórek będą uważane za kolonie, gdy staną się widoczne makroskopowo i zawierają więcej niż 50 komórek.

Te same warunki hodowli zostaną zastosowane zarówno do próbek badawczych, jak i kontrolnych. Hodowla tkankowa zostanie odrzucona po 14 dniach od zakończenia badania.

Terapia laserowa niskiego poziomu będzie laserem diodowym o długości fali 635nm, moc 40mW będzie testowana na hodowanych komórkach endometrium na płytkach Petriego S.A. o powierzchni 9,62cm2 z szybkością fluencji 4,2 J/cm2 w trybie ciągłym, głębokość penetracji przy 635nm waha się od 1 do 6 mm.

Hodowle tkankowe w grupie badanej zostaną podzielone na 2 grupy; Pierwsza grupa będzie składała się z 40 płytek do hodowli tkankowych i zostanie poddana działaniu całkowitej dawki fluencji 4,2 J/cm2 w pojedynczej sesji trwającej 16 minut z urządzeniem do terapii niskiego poziomu ustawionym na moc 40 mW. Druga grupa będzie się składać z kolejnych 40 płytek do hodowli tkankowych, będą one wystawiane na tę samą szybkość fluencji, ale w wielu sesjach „3 sesje”, które będą wykonywane co drugi dzień, każda sesja będzie trwała około 5,34 minuty przy użyciu laser niskoenergetyczny o mocy 40mW, aby osiągnąć taką samą dawkę fluencji 4,2 J/cm2 po zakończeniu 3 sesji.

Pojedyncza i wielokrotna ekspozycja na LLLT zostanie przetestowana na płytkach do hodowli endometrium i porównana z grupą kontrolną nienarażoną na działanie lasera. Porównanie ekspozycji pojedynczej sesji z ekspozycją wielokrotną jest ważne w celu określenia korzyści w stosunku do ryzyka wielokrotnych ekspozycji sesji w cienkim endometrium in vivo, będącym procedurą inwazyjną i wymagającą wprowadzenia sondy światłowodowej do wnętrza macicy, co może powodować pewne dyskomfortu dla pacjenta i może mieć na nie wpływ przestrzeganie zaleceń przez pacjenta.

Technika i etapy analizy RT-PCR:

PCR w czasie rzeczywistym zostanie wykorzystany do badań przesiewowych i wykrywania obecności markerów implantacji endometrium, a mianowicie ekspresji integryny aVB3 „alpha v B3”, MUC-1, LIF, a także ekspresji genu supresorowego guza PTEN jako wczesnego markera przedrakowej choroby endometrium .

Mikroskopia elektronowa; Komórki w hodowli tkankowej będą badane pod mikroskopem elektronowym w celu wykrycia obecności pinopodów jako markera zwiększonej receptywności endometrium.