Влияние низкоинтенсивной лазерной терапии на клетки эндометрия: исследование in vitro (LLLT)

План работы:

40 образцов человеческого эндометрия будут взяты у 40 бесплодных женщин, посещающих клинику бесплодия в Национальном исследовательском центре (каждый образец будет разделен на 3 чашки для культивирования: группа однократного воздействия, группа многократного воздействия и контрольная группа) и будут включены в изучение.

Каждый образец человеческого эндометрия будет разделен на 3 чашки, чтобы создать 3 основные группы из 40 культуральных чашек для группы однократного лазерного воздействия по сравнению с 40 культуральными чашками для группы многократного лазерного воздействия и 40 культуральными чашками для контрольных образцов, таким образом, всего 120 будут изучены планшеты с тканевой культурой, исследовательские группы будут подвергаться низкоинтенсивной лазерной терапии и сравниваться с их соответствующими контрольными группами.

Сроки взятия образца ткани эндометрия:

Биопсия ткани эндометрия будет выполняться в ранней пролиферативной фазе сразу после прекращения менструации (с 5-го по 8-й день).

Согласие Письменное информированное согласие будет получено от каждой женщины перед процедурой. В согласии будет разъяснена цель процедуры, цель исследования и возможные побочные эффекты.

Культура клеток эндометрия:

Полоски биопсии эндометрия будут взяты у женщин, включенных в исследование. Полоски биопсии эндометрия будут взяты со стенки матки с помощью пипетки.

Ткань эндометрия будет доставлена ​​в лабораторию в изолированной среде. Ткань эндометрия будет храниться при температуре 4 ° C и обрабатываться в течение 2-10 часов.

Скопления клеток будут считаться колониями, если они станут видны макроскопически и содержат более 50 клеток.

Одни и те же условия культивирования будут применяться как к исследуемым, так и к контрольным образцам. Культура ткани будет удалена через 14 дней, когда исследование будет завершено.

Низкоуровневая лазерная терапия будет представлять собой диодный лазер с длиной волны 635 нм, мощностью 40 мВт, который будет протестирован на культивируемых клетках эндометрия в чашке Петри площадью 9,62 см2 с плотностью потока энергии 4,2 Дж/см2 в непрерывном режиме, глубина проникновения при 635 нм варьируется от 1 до 6мм.

Культуры тканей в исследуемой группе будут разделены на 2 группы; 1-я группа будет состоять из 40 планшетов для тканевых культур и будет подвергаться воздействию общей дозы флюенса 4,2 Дж/см2 за один сеанс продолжительностью 16 минут с помощью аппарата низкоинтенсивной терапии, настроенного на мощность 40 мВт. 2-я группа будет состоять из еще 40 планшетов для тканевых культур, они будут подвергаться воздействию той же плотности потока энергии, но в виде нескольких сеансов «3 сеанса», которые будут проводиться через день, каждый сеанс будет длиться примерно 5,34 минуты с использованием лазером низкого уровня мощностью 40 мВт для достижения той же дозы флюенса 4,2 Дж/см2 после окончания 3-го сеанса.

Однократное или многократное воздействие НИЛТ будет протестировано в чашках для культивирования эндометрия и будет сравниваться с контрольной группой, не подвергавшейся воздействию лазера. Сравнение однократного облучения и многократного воздействия важно для определения преимуществ по сравнению с риском многократных сеансов воздействия на тонкий эндометрий in vivo, поскольку это инвазивная процедура и требуется введение фиброоптического зонда внутрь матки, что может вызвать некоторые дискомфорт для пациента и может зависеть от соблюдения пациентом режима лечения.

Техника и этапы анализа ОТ-ПЦР:

ПЦР в реальном времени будет использоваться для скрининга и обнаружения маркеров имплантации эндометрия, а именно экспрессии интегрина aVB3 «альфа v B3», MUC-1, LIF, а также экспрессии гена-супрессора опухоли PTEN в качестве раннего маркера предракового заболевания эндометрия. .

Электронная микроскопия; Клетки в культуре ткани будут исследованы под электронным микроскопом, чтобы обнаружить присутствие пиноподов в качестве маркера повышенной рецептивности эндометрия.