Effect van lasertherapie op laag niveau op endometriumcellen: een in-vitro-onderzoek (LLLT)

Werkplan:

Een aantal van 40 humane endometriummonsters zal worden verzameld van 40 onvruchtbare vrouwen die de onvruchtbaarheidskliniek van het National Research Centre bezoeken (elk monster zal worden verdeeld in 3 kweekplaten; enkele blootstellingsgroep, meervoudige blootstellingsgroep en controlegroep) en zal worden opgenomen in de studie.

Elk humaan endometriummonster wordt verdeeld in 3 platen, om 3 hoofdgroepen van 40 kweekplaten voor een enkele laserblootstellingsgroep vast te stellen versus 40 kweekplaten voor meerdere laserblootstellingsgroepen en 40 weefselkweekplaten voor controlemonsters, dus een totaal van 120 weefselkweekplaten zullen worden bestudeerd, de onderzoeksgroepen zullen worden blootgesteld aan lasertherapie op laag niveau en worden vergeleken met hun gematchte controles.

Timing van endometriumweefselmonster:

Endometriumweefselbiopsie zal worden uitgevoerd in de vroege proliferatieve fase net nadat de menstruatie is gestopt (van dag 5 tot dag 8).

Toestemming Voorafgaand aan de procedure zal van elke vrouw een schriftelijke geïnformeerde toestemming worden verkregen. In de toestemming wordt het doel van de procedure, het doel van het onderzoek en de mogelijke bijwerkingen toegelicht.

Endometriale celkweek:

Endometriumbiopsiestrips zullen worden verzameld van vrouwen die in het onderzoek zijn opgenomen. De endometriumbiopsiestrips worden met een pipelle uit de baarmoederwand gehaald.

Endometriumweefsel wordt in isolatiemedia naar het laboratorium vervoerd. Endometriumweefsel wordt bewaard bij 4°C en binnen 2-10 uur verwerkt.

Clusters van cellen worden als kolonies beschouwd wanneer ze macroscopisch zichtbaar worden en meer dan 50 cellen bevatten.

Dezelfde cultuurconditie zal worden toegepast op zowel studie- als controlemonsters. De weefselkweek wordt na 14 dagen weggegooid wanneer het onderzoek is voltooid.

Lasertherapie op laag niveau zal een diodelaser zijn met een golflengte van 635 nm, een vermogen van 40 mw zal worden getest op gekweekte endometriumcellen in petrischaal S.A. 6mm.

Weefselkweken in de onderzoeksgroep worden verdeeld in 2 groepen; De eerste groep zal bestaan ​​uit 40 weefselkweekplaten en zal worden blootgesteld aan de totale fluentiedosis van 4,2 J/cm2 in een enkele sessie van 16 minuten met een therapieapparaat op laag niveau, afgesteld op een vermogen van 40 mW. De 2e groep zal bestaan ​​uit nog eens 40 weefselkweekplaten, ze zullen worden blootgesteld aan dezelfde fluence rate, maar in meerdere sessies ''3 sessies'', die om de dag zullen worden uitgevoerd, zal elke sessie ongeveer 5,34 minuten duren met behulp van low level laser met een vermogen van 40mW om dezelfde fluentiedosis van 4,2 J/cm2 te bereiken na het beëindigen van de 3e sessie.

Enkelvoudige versus meervoudige blootstellingen van LLLT zullen worden getest in de endometriumkweekplaten en zullen worden vergeleken met de controlegroep die niet is blootgesteld aan laser. Vergelijking tussen blootstelling aan een enkele sessie en blootstelling aan meerdere sessies is belangrijk om de voordelen te bepalen ten opzichte van het risico van sessies met meerdere blootstellingen in dun endometrium in vivo, aangezien dit een invasieve procedure is en het inbrengen van een fibro-optische sonde in de baarmoeder vereist, wat enige ongemak voor de patiënt en kan worden beïnvloed door de therapietrouw van de patiënt.

RT-PCR Analysetechniek en stappen:

Realtime PCR zal worden gebruikt om de aanwezigheid van endometriumimplantatiemarkers te screenen en te detecteren, namelijk de expressie van Integrin aVB3 "alpha v B3", MUC-1, LIF en ook de expressie van het PTEN-tumorsuppressorgen als een vroege marker voor premaligne endometriumziekte .

elektronenmicroscopie; Cellen in weefselkweek zullen worden onderzocht met een elektronenmicroscoop om de aanwezigheid van pinopoden te detecteren als een marker van verhoogde endometriumreceptiviteit.