Počet kolonií P.Acnes po subdermálním cefazolinu

Účel Účelem studie je posoudit, zda subdermální injekce antibiotik během operace snižuje bakteriální zátěž v podkoží během operace otevřeného ramene.

Nulová hypotéza Po podání subdermálních antibiotik se počet kolonií P. acnes nezmění.

Odůvodnění. P. Acnes je nejčastější příčinou infekce ramene. Incidence pooperační infekce ramenního kloubu se pohybuje od 4 do 18 %. Organismus P.acnes je grampozitivní, převážně anaerobní, ale aerotolerantní komenzál hlubokých kožních folikulů a standardní příprava kůže může nedostatečně proniknout do pilosebaceózních folikulů. Studie Levyho a spol. také ukázala, že 41,8 % pacientů mělo před implantací komponent pozitivní výsledek biopsie nebo aspirátu na P. acnes. Tato studie určí, zda intraoperační subdermální podávání antibiotik snižuje bakteriální zátěž a následně snižuje výskyt infekce ramenního kloubu. Cefazolin byl vybrán, protože cefalosporiny a peniciliny mají nejnižší minimální inhibiční koncentraci (MIC) proti P. acnes. Výskyt alergie na cefalosporiny je nižší než na peniciliny. Tato studie má potenciál změnit klinickou praxi po celém světě.

Cíle Konkrétním výsledkem je porovnat počet bakteriálních buněk na obou stranách chirurgické rány a určit, zda subkutánní antibiotika na jedné straně snižují počet subkutánních buněk v různých časových intervalech během operace.

Metoda výzkumu. Cílený nábor je v této pilotní studii 20 pacientů. K tomuto údaji se dospělo po stanovení síly studie, hladin významnosti a očekávaného poklesu počtu kolonizací P. acnes po použití lokálních antibiotik. Je to také číslo, kterého lze dosáhnout rychle, což nám umožňuje posoudit, zda existuje pozorovaný rozdíl mezi skupinami, a tím posoudit proveditelnost většího pokusu.

Pacienti dostanou standardní předoperační antibiotika 30 minut před incizí a chirurgickým zákrokem. Kůže bude také připravena pomocí roztoku na bázi alkoholu chlorhexidinu, jak je standardem v instituci zkoušejícího. Vyšetřovatelé rozdělí normální chirurgický řez na tři stejné části na každé straně řezu, čímž vytvoří šest segmentů. Na jednu stranu rány budou injikovány tři alikvoty po 3 ml s použitím koncentrace 100 mg/ml cefazolinu. To odpovídá 900 mg subkutánního cefazolinového antibiotika. Neexistují žádná specifická kritéria účinnosti pro agenty v tomto nastavení, která byla standardizována a schválena oficiální dozorčí agenturou. Toto množství jsme vybrali na základě bezpečného a široce rozšířeného používání této koncentrace systémovým způsobem a také s ohledem na snadno dostupné koncentrace. Není známa žádná studie popisující jakékoli poškození při zavádění antibiotik do měkkých tkání, např. vankomycin používaný lokálně v protetických kloubech jako profylaxe proti infekci a rozšířené použití intramuskulárních (IM) penicilinových produktů. Bylo prokázáno, že subkutánní cefazolin je bezpečný na prasečím modelu, přičemž poskytuje vyšší kožní koncentrace než při srovnávacím systémovém podávání. Subkutánní ceftriaxon je schválen pro použití ve Francii a jeho použití se zvyšuje u geriatrické populace i u lékařů zabývajících se infekčními nemocemi. Jsou publikovány důkazy o bezpečném podávání cefazolinu v tumescentní anestezii při podávání antibiotik ve směsi s lidokainem, adrenalinem a hydrogenuhličitanem sodným.

Standardizované vzorky ze všech šesti řezů budou před inokulací odebrány pomocí jednorázového 6mm bioptického razníku Mitex a tento proces bude opakován po 60 minutách. Vzorky budou odeslány do mikrobiologické laboratoře, kde se zjistí počet kolonií a provedou se dlouhodobé kultivace, tj. 3 týdny.

V chirurgii je rutinní injekce subkutánních látek a nezřídka se odebírají biopsie. Jediným potenciálním vedlejším účinkem je alergie na cefalosporiny, která by byla stanovena předoperačně a je součástí vylučovacích kritérií. Neočekává se zvýšený výskyt infekce nebo krvácení.

Odběr, manipulace a skladování Vzorky budou označeny příslušnými identifikátory pacienta a jasně označeny, pokud jde o místo odběru, a okamžitě odeslány do laboratoře ke zpracování co nejdříve. Tkáňové biopsie budou zasílány buď v anaerobním transportním médiu nebo ve sterilním kontejneru s kouskem sterilní gázy navlhčené nebakteriostatickým fyziologickým roztokem, nebo pokud je kus dostatečně velký, jen několik kapek nebakteriostatického v kontejneru, aby se zabránilo tkáni od vysychání.

Zpracování tkání Všechny manipulace se vzorky budou provedeny v kabinetu biologické bezpečnosti a zpracovány co nejdříve. Tkáně budou naočkovány do média, aby se maximalizovala regenerace Propionibacterium acnes, která bude zahrnovat 5% agar z ovčí krve a misky s čokoládovým agarem a thioglykolát (THIO) bujón inkubovaný pod 5% oxidem uhličitým (CO2) při 35 °C. Agary Brucella a Columbia s kyselinou naladixovou (CNA) budou inkubovány v anaerobních podmínkách při 35 °C.

Pomocí sterilních kleští bude tkáň přenesena na sterilní Petriho misku. Pomocí jednorázového sterilního skalpelu se tkáň naseká na dostatečné množství malých kousků, aby bylo možné naočkovat všechna potřebná média. Do THIO vývaru se přidá několik kousků tkáně. Zbývající média budou naočkována v pořadí od nejméně selektivního až po nejvíce selektivní: miska s krevním agarem, miska s čokoládovým agarem, agar Brucella a CNA.

Nakonec se provedou "dotykové přípravy" pro gramové nátěry jemným dotykem čerstvého kousku tkáně na mikroskopická sklíčka. Tento kousek tkáně bude zlikvidován, protože je nyní potenciálně kontaminovaný.

Vyšetřování tkání

Všechna média budou inkubována po dobu 5 dnů a denně čtena. Bujón bude držen po dobu 21 dnů a vyšetřen 7, 14 a 21 dnů po počátečních 5 dnech odečítání. Není nutné sledovat pacienty po dobu 2 let, protože se snažíme pouze určit změnu v počtu kolonií během operace, kterou lze určit do 21 dnů a může být spojena se snížením infekce.

Veškerý bakteriální růst bude zkoumán obvyklými laboratorními postupy pro identifikaci a testování antimikrobiální citlivosti.

Výsledky budou včas oznámeny vyšetřovatelům studie

Statistická analýza. Vzorky budou porovnány s každou stranou rány během příslušných časových období. Průměry počtu budou získány a analyzovány pomocí párového t-testu.