Liczba kolonii P.Acnes po podskórnym podaniu cefazoliny

Cel Celem pracy jest ocena, czy śródoperacyjna iniekcja podskórna antybiotyków zmniejsza obciążenie bakteryjne tkanki podskórnej podczas operacji otwartego barku.

Hipoteza zerowa Po podskórnym podaniu antybiotyków liczba kolonii P.acnes nie ulegnie zmianie.

Uzasadnienie. P. Acnes jest najczęstszą przyczyną infekcji barku. Częstość występowania pooperacyjnego zakażenia stawu barkowego waha się od 4 do 18%. Bakterie P.acnes są Gram-dodatnimi, w dużej mierze beztlenowymi, ale tolerującymi powietrze komensalami mieszków włosowych, a standardowe preparaty skórne mogą niewłaściwie penetrować mieszki włosowo-łojowe. W badaniu przeprowadzonym przez Levy'ego i wsp. wykazano również, że 41,8% pacjentów miało pozytywny wynik biopsji lub aspiratu w kierunku P.acnes przed wszczepieniem elementów. Badanie to określi, czy śródoperacyjne podskórne podawanie antybiotyków zmniejsza ilość bakterii, a tym samym zmniejsza częstość występowania infekcji stawu barkowego. Wybrano cefazolinę, ponieważ cefalosporyny i penicyliny mają najniższe minimalne stężenie hamujące (MIC) przeciwko P.acnes. Częstość występowania alergii na cefalosporyny jest mniejsza niż na penicyliny. To badanie może zmienić praktykę kliniczną na całym świecie.

Cele Konkretnym wynikiem jest porównanie liczby komórek bakteryjnych po obu stronach rany chirurgicznej i określenie, czy antybiotyki podawane podskórnie po jednej stronie zmniejszają liczbę komórek podskórnych w różnym czasie trwania operacji.

Metoda badań. Ukierunkowana rekrutacja obejmuje 20 pacjentów w tym badaniu pilotażowym. Liczbę tę uzyskano po określeniu mocy badania, poziomów istotności i przewidywanego spadku liczby kolonizacji P.acnes po zastosowaniu miejscowych antybiotyków. Jest to również liczba, którą można szybko osiągnąć, co pozwala nam ocenić, czy istnieje zaobserwowana różnica między grupami, a tym samym ocenić wykonalność większej próby.

Pacjenci otrzymają standardowe antybiotyki przedoperacyjne na 30 minut przed nacięciem i interwencją chirurgiczną. Skóra zostanie również przygotowana przy użyciu roztworu na bazie alkoholu chlorheksydyny, jak to jest standardem w instytucji badacza. Badacze podzielą normalne nacięcie chirurgiczne na trzy równe części po obu stronach nacięcia, tworząc w ten sposób sześć segmentów. W jedną stronę rany zostaną wstrzyknięte trzy porcje po 3 ml przy użyciu cefazoliny w stężeniu 100 mg/ml. Odpowiada to 900 mg podanej podskórnie antybiotyku cefazolinowego. Nie ma określonych kryteriów skuteczności dla środków w tym ustawieniu, które zostały wystandaryzowane i zatwierdzone przez oficjalną agencję nadzoru. Wybraliśmy tę ilość w oparciu o bezpieczne i powszechne stosowanie tego stężenia w sposób ogólnoustrojowy, a także pamiętając o łatwo dostępnych stężeniach. Nie są znane żadne badania opisujące szkodliwość wprowadzenia antybiotyków do tkanek miękkich, np. wankomycyna stosowana miejscowo w protezach stawów jako profilaktyka infekcji oraz powszechne stosowanie penicyliny podawanej domięśniowo. Wykazano, że cefazolina podana podskórnie jest bezpieczna w modelu świńskim, a jej stężenie w skórze jest wyższe niż w przypadku porównawczego podawania ogólnoustrojowego. Podanie podskórne ceftriaksonu jest zatwierdzone do stosowania we Francji i jest coraz częściej stosowane w populacjach geriatrycznych, jak również przez lekarzy zajmujących się chorobami zakaźnymi. Opublikowano dowody na bezpieczne podawanie cefazoliny w znieczuleniu tumescencyjnym podaniem antybiotyku zmieszanego z lidokainą, epinefryną i wodorowęglanem sodu.

Standaryzowane próbki ze wszystkich sześciu skrawków zostaną pobrane przy użyciu jednorazowego stempla biopsyjnego Mitex 6 mm przed inokulacją i proces ten zostanie powtórzony po 60 minutach. Próbki zostaną wysłane do laboratorium mikrobiologicznego, gdzie zostanie zliczona liczba kolonii i przeprowadzone zostaną długoterminowe hodowle, tj. 3 tygodnie.

W chirurgii rutynowe jest wstrzykiwanie substancji podskórnych i nierzadko pobierane są biopsje. Jedynym potencjalnym działaniem niepożądanym jest alergia na cefalosporyny, która zostałaby stwierdzona przed operacją i jest częścią kryteriów wykluczenia. Nie przewiduje się zwiększonej częstości występowania infekcji ani krwawień.

Pobieranie, obchodzenie się i przechowywanie Próbki zostaną oznakowane odpowiednimi identyfikatorami pacjenta i wyraźnie oznaczone miejscem pobrania oraz niezwłocznie wysłane do laboratorium w celu przetworzenia tak szybko, jak to możliwe. Biopsje tkankowe zostaną wysłane w beztlenowych środkach transportowych lub w sterylnym pojemniku z kawałkiem sterylnej gazy zwilżonej niebakteriostatyczną solą fizjologiczną lub, jeśli kawałek jest wystarczająco duży, wystarczy kilka kropli niebakteriostatycznego w pojemniku, aby zapobiec od wysuszenia.

Przetwarzanie tkanek Wszystkie manipulacje próbkami będą przeprowadzane w Gabinecie Bezpieczeństwa Biologicznego i przetwarzane tak szybko, jak to możliwe. Tkanki zostaną zaszczepione na pożywkę, aby zmaksymalizować odzysk Propionibacterium acnes, która będzie obejmowała 5% agar z krwią owczą i płytki z agarem czekoladowym oraz bulion tioglikolowy (THIO) inkubowany w atmosferze 5% dwutlenku węgla (CO2) w 35 stopniach Celsjusza. Agary Brucella i Columbia z kwasem naladyksa (CNA) będą inkubowane w warunkach beztlenowych w temperaturze 35 stopni Celsjusza.

Za pomocą sterylnych szczypiec tkanka zostanie przeniesiona na sterylną płytkę Petriego. Za pomocą sterylnego skalpela jednorazowego użytku tkanka zostanie pocięta na wystarczająco małe kawałki, aby zaszczepić wszystkie wymagane podłoża. Do bulionu THIO zostanie dodanych kilka kawałków tkanki. Pozostałe podłoża zostaną zaszczepione w kolejności od najmniej selektywnej do najbardziej selektywnej: płytka z agarem z krwią, płytka z agarem czekoladowym, agar Brucella i CNA.

Na koniec zostaną przeprowadzone „przygotowania dotykowe” do rozmazów gramowych poprzez delikatne dotknięcie świeżego kawałka tkanki na szkiełkach mikroskopowych. Ten kawałek tkanki zostanie wyrzucony, ponieważ jest teraz potencjalnie zanieczyszczony.

Badanie tkanek

Wszystkie pożywki będą inkubowane przez 5 dni i odczytywane codziennie. Bulion będzie przechowywany przez 21 dni i zbadany po 7, 14 i 21 dniach od odczytów z pierwszych 5 dni. Nie ma potrzeby obserwowania pacjentów przez 2 lata, ponieważ chcemy jedynie określić zmianę w śródoperacyjnej liczbie kolonii, którą można określić w ciągu 21 dni i która może być powiązana ze zmniejszeniem infekcji.

Wszystkie wzrosty bakterii będą badane zgodnie ze zwykłymi procedurami laboratoryjnymi w celu identyfikacji i oznaczania wrażliwości na środki przeciwdrobnoustrojowe.

Wyniki zostaną przekazane badaczom w odpowiednim czasie

Analiza statystyczna. Próbki zostaną porównane z obiema stronami rany w odpowiednich okresach czasu. Średnie zliczeń zostaną uzyskane i przeanalizowane przy użyciu sparowanego testu t.