Studie asociace slinných adipokinů s prediabetem a diabetes mellitus 2. typu

Tato studie se provádí v nemocnici terciární péče, Dr.A.Ramachandrana Diabetes Hospitals, Chennai. Osoby bez diabetu v anamnéze, které vyhledávají screening na diabetes, budou pozvány k účasti ve studii a po podepsání formuláře informovaného souhlasu jim bude hodnoceno skóre rizika. Pacienti, kteří splňují kritéria pro zařazení, budou zařazeni do této studie a budou provedeny další testy. Pozveme také manžela/manželku pacienta, příbuzné nebo přátele, kteří jsou ochotni se této studie zúčastnit.

Předběžný screening: Tým tvoří jeden vědecký pracovník (zubař), jeden vědecký pracovník, dva laboratorní technici a jeden laboratorní asistent. Měření budou posuzována stejnými členy týmu během screeningu, aby se eliminovaly potenciální odchylky mezi pozorovateli. Účastníci ve věku ≥ 35 let, kteří navštíví kliniku, budou pozváni k předběžnému screeningu. Hmotnost a výška se měří s účastníky v lehkém oblečení bez bot. Vypočítá se BMI (kg/m2). Obvod pasu se měří uprostřed mezi dolním okrajem žebra a hřebenem kyčelní kosti. Krevní tlak se měří pomocí standardního rtuťového tlakoměru po 5minutovém odpočinku. Pro analýzu se použije průměr ze dvou hodnot. Bude zjištěna předchozí anamnéza hypertenze, hraničního diabetu a těhotenského diabetu. Rodinná anamnéza diabetu, srdečních chorob, mrtvice a sedavého způsobu života se zaznamenává do strukturovaného dotazníku. Pokud má účastník 2 nebo více rizikových faktorů, bude mu testována hladina glukózy v plazmě nalačno a 2 hodiny po 75 g orální glukózy (Accu check performa, Roche Diagnostics).

Další den budou účastníci rozděleni do kategorií na základě kritérií pro zařazení a vyloučení jako normoglykemičtí, prediabetičtí (IFG/IGT) a nově diagnostikovaní pacienti s diabetem 2. typu. Vybraní účastníci podstoupí stomatologické vyšetření pro kontrolu paradentózy. Poté je od všech jedinců odebrán vzorek slin a séra nalačno pro odhad biomarkerů (adiponektin, apelin, visfatin a vaspin). HbA1c, lipidový profil a gama-glutamyltransferáza (GGT) jsou analyzovány v séru nalačno.

Do zkumavky se sérem se odebere přibližně 10 ml krve. Separace krevních vzorků se provádí v centrální vyšetřovací laboratoři. Vzorky krve jsou separovány, rozděleny na alikvoty, chlazeny a okamžitě skladovány při -70 °C pro analýzu biomarkerů. HbA1c se měří imunoturbidometrií (tina-quant II; roche diagnostics corporation, německo); postup certifikovaný národním programem normalizace glykohemoglobinu. Sérový lipidový profil nalačno (celkový cholesterol, triglyceridy a lipoprotein s vysokou hustotou, cholesterol) a GGT se odhadují pomocí standardních enzymatických metod. Biochemické testy se provádějí na autoanalyzátoru Cobas Integra 450 plus (Roche, Německo) s použitím činidel od Roche diagnostics s vhodnými metodami kontroly kvality (referenční sérum Roche diagnostics).

Nestimulované vzorky slin budou odebírány do zkumavky pro odběr vzorků. Účastník bude požádán, aby se asi dvě hodiny před odběrem slin zdržel jídla a pití; dělá se to kolem 8-10h. Subjekty budou požádány, aby si vypláchly ústa pitnou vodou a poté vykašlovaly celé sliny do odběrové zkumavky. Sliny se poté odstřeďují při 9300 g při 40 °C po dobu asi 10 minut a poté se skladují při -70 °C až do dalšího použití.

Sliny a plazma budou rozmraženy při pokojové teplotě pro měření biomarkerů pomocí enzymové imunoanalýzy (ELISA). Používá se komerční souprava ELISA pro lidské biomarkery pro sérum a sliny a test se provádí podle pokynů výrobce. Každý vzorek slin a plazmy od stejného pacienta bude analyzován ve stejné experimentální sadě. Vzorky plazmy vyžadují ředění. Vzorky slin budou analyzovány bez ředění.

Zprávy budou z centrální laboratoře účastníkům zaslány kurýrem. Účastníci s nově diagnostikovaným diabetem nebo nekontrolovaným diabetem budou odesláni k léčbě k diabetologovi a sledováni po dobu dvou let. Jedincům s prediabetem bude doporučeno zlepšit fyzickou aktivitu a stravovací návyky a budou sledováni po dobu dvou let. Účastníci s parodontitidou budou odesláni k zubnímu chirurgovi a sledováni po dobu dvou let.

Během návštěvy 4 a 6 bude měřena váha účastníka, obvod pasu, BMI, krevní tlak a laboratorní vyšetření, jako je hladina glukózy v krvi nalačno a 2 hodiny po jídle, HbA1c a lipidový profil. Při návštěvě 6 se odeberou vzorky slin a séra účastníka pro měření adipokinů.