Studie av foreningen av spyttadipokiner med prediabetes og type 2 diabetes mellitus

Denne studien er utført på et tertiærsykehus, Dr.A.Ramachandran's Diabetes Hospitals, Chennai. Personer uten diabetes som søker screening for diabetes vil bli invitert til å delta i studien, og etter å ha signert skjemaet for informert samtykke vil de bli vurdert av risikoskåren. Pasientene som oppfyller inklusjonskriteriene vil bli registrert i denne studien og ytterligere tester vil bli utført. Vi vil også invitere pasientens ektefelle, slektninger eller venner som er villige til å delta i denne studien.

Foreløpig screening: Teamet består av en forskningsmedarbeider (tannlege), en forskningsmedarbeider, to laboratorieteknikere og en laboratorieassistent. Målingene vil bli vurdert av de samme medlemmene av teamet gjennom screeningen, for å eliminere potensiell variasjon mellom observatører. Deltakere i alderen ≥35 år som besøker klinikken vil bli invitert til å gjennomgå en foreløpig screening. Vekt og høyde måles med deltakerne iført lette klær uten sko. BMI er beregnet (kg/m2). Midjeomkretsen måles midt mellom nedre ribbekant og hoftekammen. Blodtrykket måles med et standard kvikksølv-sfygmomanometer etter en 5-minutters hvile. Et gjennomsnitt av de to avlesningene brukes til analysen. Tidligere historie med hypertensjon, borderline diabetes og svangerskapsdiabetes vil bli konstatert. Familiehistorie med diabetes, hjertesykdom, hjerneslag og stillesittende livsstil registreres i et strukturert spørreskjema. Hvis deltakeren har 2 eller flere risikofaktorer, vil de bli testet for faste og 2 timers plasmaglukose etter 75 g oral glukose (Accu check performa, Roche Diagnostics).

Neste dag vil deltakerne bli kategorisert basert på inklusjons- og eksklusjonskriteriene som normoglykemiske, prediabetiske (IFG/IGT) og nydiagnostiserte type 2 diabetespasienter. De utvalgte deltakerne vil gjennomgå tannundersøkelse for å sjekke for periodontitt. Deretter tas spytt- og fastende serumprøve fra alle individene for estimering av biomarkører (adiponectin, apelin, visfatin og vaspin). HbA1c, lipidprofil og gamma-glutamyl transferase (GGT) analyseres i fastende serum.

Omtrent 10 ml blod samles i et serumrør. Blodprøveseparasjon utføres ved sentralt undersøkelseslaboratorium. Blodprøver separeres, alikvoteres, avkjøles og lagres umiddelbart ved -70˚C for biomarkøranalyse. HbA1c måles ved immunturbidometri (tina-quant II; roche diagnostics corporation, tyskland); en prosedyre sertifisert av det nasjonale standardiseringsprogrammet for glykohemoglobin. Den fastende serumlipidprofilen (totalkolesterol, triglyserider og høydensitetslipoprotein, kolesterol) og GGT estimeres ved bruk av standard enzymatiske metoder. Biokjemiske analyser utføres på en Cobas Integra 450 plus (Roche, Tyskland) autoanalyzer ved bruk av reagenser fra Roche diagnostics, med passende kvalitetskontrollmetoder (Roche diagnostics referanseserum).

Ustimulerte spyttprøver vil bli samlet i et prøvetakingsrør. Deltakeren vil bli bedt om å avstå fra å spise eller drikke i omtrent to timer før spyttoppsamling; det gjøres rundt 08.00 - 10.00. Forsøkspersonene vil bli bedt om å skylle munnen med drikkevann og deretter oppspytte hele spytt i et oppsamlingsrør. Spyttet sentrifugeres deretter ved 9300g ved 40 C i ca. 10 minutter og oppbevares deretter ved -70 grader C, inntil videre bruk.

Spytt og plasma vil bli tint ved romtemperatur for måling av biomarkører ved enzymkoblet immunosorbentanalyse (ELISA). Et kommersielt ELISA-sett for humane biomarkører for serum og spytt brukes, og analysen utføres i henhold til produsentens instruksjoner. Hver prøve av spytt og plasma fra samme pasient vil bli analysert i samme eksperimentelle sett. Plasmaprøver krever fortynning. Spyttprøver vil bli analysert uten fortynning.

Rapporter vil bli sendt fra sentrallaboratoriet til deltakerne med bud. Deltakere med nydiagnostisert diabetes eller ukontrollert diabetes vil bli henvist til diabetolog for behandling og fulgt opp i to år. Personer med prediabetes vil bli rådet til å forbedre fysisk aktivitet og kostholdsvaner og følges opp i to år. Deltakere med periodontitt vil bli henvist til tannkirurg og fulgt opp i to år.

Under besøk 4 og 6 vil deltakerens vekt, midjeomkrets, BMI, blodtrykk bli målt og laboratorieundersøkelser som faste og 2 timers postprandial blodsukker, HbA1c og lipidprofil. Ved besøk 6 blir deltakerens spytt- og serumprøver samlet inn for adipokinmåling.