Studie van de associatie van speeksel-adipokines met prediabetes en diabetes mellitus type 2

Deze studie wordt uitgevoerd in een ziekenhuis voor tertiaire zorg, Dr.A.Ramachandran's Diabetes Hospitals, Chennai. De personen zonder voorgeschiedenis van diabetes die op zoek zijn naar een screening op diabetes zullen worden uitgenodigd om deel te nemen aan het onderzoek en na ondertekening van het formulier voor geïnformeerde toestemming zullen zij worden beoordeeld aan de hand van de risicoscore. De patiënten die aan de inclusiecriteria voldoen, zullen in deze studie worden opgenomen en er zullen aanvullende tests worden uitgevoerd. We zullen ook de partner, familieleden of vrienden van de patiënt uitnodigen die bereid zijn deel te nemen aan dit onderzoek.

Vooronderzoek: Het team bestaat uit een onderzoeksmedewerker (tandarts), een onderzoeksmedewerker, twee laboranten en een laborant. De metingen worden tijdens de hele screening door dezelfde leden van het team beoordeeld om mogelijke variaties tussen waarnemers te elimineren. Deelnemers van ≥35 jaar die de kliniek bezoeken, worden uitgenodigd voor een vooronderzoek. Gewicht en lengte worden gemeten terwijl de deelnemers lichte kleding zonder schoenen dragen. BMI wordt berekend (kg/m2). De tailleomtrek wordt gemeten halverwege tussen de onderste ribrand en de crista iliaca. De bloeddruk wordt gemeten met een standaard kwikbloeddrukmeter na 5 minuten rust. Voor de analyse wordt een gemiddelde van de twee meetwaarden gebruikt. Voorgeschiedenis van hypertensie, borderline diabetes en zwangerschapsdiabetes zal worden vastgesteld. De familiegeschiedenis van diabetes, hartaandoeningen, beroertes en sedentaire levensstijl wordt vastgelegd in een gestructureerde vragenlijst. Als de deelnemer 2 of meer risicofactoren heeft, wordt hij getest op vasten en 2 uur plasmaglucose na 75 g orale glucose (Accu check performa, Roche Diagnostics).

De volgende dag worden de deelnemers gecategoriseerd op basis van de in- en uitsluitingscriteria als normoglycemische, pre-diabetische (IFG/IGT) en nieuw gediagnosticeerde diabetes type 2-patiënten. De geselecteerde deelnemers ondergaan een tandheelkundig onderzoek om te controleren op parodontitis. Vervolgens wordt van alle individuen een speeksel- en nuchter serummonster verkregen voor schatting van biomarkers (adiponectine, apeline, visfatin en vaspin). HbA1c, Lipidenprofiel en Gamma-glutamyltransferase (GGT) worden geanalyseerd in nuchter serum.

In een serumbuisje wordt ongeveer 10 ml bloed opgevangen. Het scheiden van bloedmonsters vindt plaats in het centrale onderzoekslaboratorium. Bloedmonsters worden gescheiden, in porties verdeeld, gekoeld bewaard en onmiddellijk bij -70˚C opgeslagen voor biomarkeranalyse. HbA1c wordt gemeten met immunoturbidometrie (tina-quant II; Roche Diagnostics Corporation, Duitsland); een procedure die is gecertificeerd door het nationale standaardisatieprogramma voor glycohemoglobine. Het nuchtere serumlipidenprofiel (totaal cholesterol, triglyceriden en lipoproteïne met hoge dichtheid, cholesterol) en GGT wordt geschat met behulp van standaard enzymatische methoden. Biochemische assays worden uitgevoerd op een Cobas Integra 450 plus (Roche, Duitsland) autoanalysator met behulp van reagentia van Roche diagnostics, met geschikte kwaliteitscontrolemethoden (Roche diagnostics referentieserum).

Ongestimuleerde speekselmonsters worden verzameld in een monsterverzamelbuisje. De deelnemer wordt gevraagd om ongeveer twee uur voorafgaand aan het verzamelen van speeksel niet te eten of te drinken; het is klaar rond 8.00 - 10.00 uur. De proefpersonen wordt gevraagd hun mond te spoelen met drinkwater en vervolgens heel speeksel op te spuwen in een verzamelbuisje. Het speeksel wordt vervolgens gecentrifugeerd bij 9300 g bij 40°C gedurende ongeveer 10 minuten en vervolgens bewaard bij -70°C, tot verder gebruik.

Speeksel en plasma worden bij kamertemperatuur ontdooid voor biomarkersmeting door enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA). Er wordt een commerciële ELISA-kit voor menselijke biomarkers voor serum en speeksel gebruikt en de test wordt uitgevoerd volgens de instructies van de fabrikant. Elk speeksel- en plasmamonster van dezelfde patiënt wordt in dezelfde experimentele set geanalyseerd. Plasmamonsters vereisen verdunning. Speekselmonsters worden onverdund geanalyseerd.

Rapporten worden per koerier verzonden vanuit het centrale laboratorium naar de deelnemers. Deelnemers met nieuw gediagnosticeerde diabetes of ongecontroleerde diabetes worden voor behandeling doorverwezen naar een diabetoloog en gedurende twee jaar gevolgd. Personen met prediabetes zullen worden geadviseerd om fysieke activiteit en voedingsgewoonten te verbeteren en gedurende twee jaar worden opgevolgd. Deelnemers met parodontitis worden doorverwezen naar een kaakchirurg en gedurende twee jaar gevolgd.

Tijdens bezoek 4 & 6 worden het gewicht, de middelomtrek, de BMI, de bloeddruk van de deelnemer gemeten en laboratoriumonderzoeken zoals vasten en 2 uur postprandiale bloedglucose, HbA1c en lipidenprofiel uitgevoerd. Bij bezoek 6 worden de speeksel- en serummonsters van de deelnemer verzameld voor adipokinemetingen.