Tutkimus syljen adipokiinien yhdistämisestä esidiabetekseen ja tyypin 2 diabetekseen

Tämä tutkimus suoritetaan korkea-asteen hoidon sairaalassa, Dr.A.Ramachandran's Diabetes Hospitalsissa, Chennaissa. Tutkimukseen kutsutaan henkilöt, joilla ei ole diabetesta ja jotka hakeutuvat diabeteksen seulontaan, ja heidän allekirjoituksensa jälkeen heidät arvioidaan riskipisteellä. Potilaat, jotka täyttävät osallistumiskriteerit, otetaan mukaan tähän tutkimukseen ja tehdään lisätestejä. Kutsumme myös potilaan puolison, sukulaiset tai ystävät, jotka ovat halukkaita osallistumaan tähän tutkimukseen.

Alustava seulonta: Ryhmään kuuluu yksi tutkija (hammaslääkäri), yksi tutkija, kaksi laboratorioteknikot ja yksi laborantti. Samat ryhmän jäsenet arvioivat mittauksia koko seulonnan ajan mahdollisen tarkkailijoiden välisen vaihtelun poistamiseksi. Klinikalla käyvät ≥35-vuotiaat osallistujat kutsutaan alustavaan seulontaan. Paino ja pituus mitataan osallistujilla kevyissä vaatteissa ilman kenkiä. BMI lasketaan (kg/m2). Vyötärön ympärysmitta mitataan kylkiluun alareunan ja suoliluun harjanteen väliltä. Verenpaine mitataan tavallisella elohopeaverenpainemittarilla 5 minuutin levon jälkeen. Analyysissä käytetään kahden lukeman keskiarvoa. Aiempi verenpainetaudin, rajadiabeteksen ja raskausdiabeteksen historia selvitetään. Suvussa esiintynyt diabetes, sydänsairaus, aivohalvaus ja istuvat elämäntavat kirjataan jäsenneltyyn kyselyyn. Jos osallistujalla on 2 tai useampia riskitekijöitä, hänelle testataan paasto ja 2 tunnin plasman glukoosi 75 gramman oraalisen glukoosin jälkeen (Accu check performa, Roche Diagnostics).

Seuraavana päivänä osallistujat luokitellaan mukaanotto- ja poissulkemiskriteerien perusteella normoglykeemisiksi, prediabeettisiksi (IFG/IGT) ja äskettäin diagnosoiduiksi tyypin 2 diabeetikoiksi. Valitut osallistujat käyvät hammastarkastuksessa parodontiittien varalta. Tämän jälkeen kaikilta yksilöiltä otetaan sylki- ja paastoseeruminäyte biomarkkerien (adiponektiini, apeliin, visfatiini ja vaspin) arvioimiseksi. HbA1c, lipidiprofiili ja gamma-glutamyylitransferaasi (GGT) analysoidaan paastoseerumissa.

Noin 10 ml verta kerätään seerumiputkeen. Verinäytteiden erottelu suoritetaan keskustutkimuslaboratoriossa. Verinäytteet erotetaan, jaetaan eriin, jäähdytetään ja säilytetään välittömästi -70 ˚C:ssa biomarkkerianalyysiä varten. HbA1c mitataan immunoturbidometrialla (tina-quant II; roche diagnostics corporation, saksa); kansallisen glykohemoglobiinin standardointiohjelman sertifioima menettely. Seerumin lipidiprofiili (kokonaiskolesteroli, triglyseridit ja korkeatiheyksiset lipoproteiinit, kolesteroli) ja GGT arvioidaan tavallisilla entsymaattisilla menetelmillä. Biokemialliset määritykset suoritetaan Cobas Integra 450 plus (Roche, Saksa) autoanalysaattorilla käyttäen Roche diagnosticsin reagensseja asianmukaisin laadunvalvontamenetelmin (Roche diagnostics referenssiseerumi).

Stimuloimattomat sylkinäytteet kerätään näytteenottoputkeen. Osallistujaa pyydetään pidättäytymään syömästä tai juomasta noin kaksi tuntia ennen syljen keräämistä; se tehdään noin klo 8-10. Koehenkilöitä pyydetään huuhtelemaan suunsa juomavedellä ja eristämään sitten koko sylki keräysputkeen. Sen jälkeen sylkeä sentrifugoidaan 9300 g:llä 40 C:ssa noin 10 minuuttia ja säilytetään sitten -70 °C:ssa jatkokäyttöön asti.

Sylki ja plasma sulatetaan huoneenlämpötilassa biomarkkerien mittaamista varten entsyymi-immunosorbenttimäärityksellä (ELISA). Käytetään kaupallista ELISA-pakkausta seerumin ja syljen ihmisen biomarkkereille, ja määritys suoritetaan valmistajan ohjeiden mukaisesti. Jokainen saman potilaan sylki- ja plasmanäyte analysoidaan samassa koesarjassa. Plasmanäytteet vaativat laimentamisen. Sylkinäytteet analysoidaan laimentamatta.

Raportit lähetetään keskuslaboratoriosta osallistujille kuriirin välityksellä. Osallistujat, joilla on äskettäin diagnosoitu diabetes tai hallitsematon diabetes, lähetetään diabetologin hoitoon ja seurataan kahden vuoden ajan. Esidiabeteksen sairastavia neuvotaan parantamaan fyysistä aktiivisuutta ja ruokailutottumuksia, ja heitä seurataan kahden vuoden ajan. Parodontiittia sairastavat ohjataan hammaskirurgin vastaanotolle ja niitä seurataan kahden vuoden ajan.

Vierailujen 4 ja 6 aikana mitataan osallistujan paino, vyötärön ympärysmitta, BMI, verenpaine ja laboratoriotutkimuksia, kuten paasto ja 2 tuntia aterian jälkeinen verensokeri, HbA1c ja lipidiprofiili. Vierailulla 6 kerätään osallistujan sylki- ja seeruminäytteet adipokiinien mittausta varten.