Studie zum Zusammenhang von Speicheladipokinen mit Prädiabetes und Typ-2-Diabetes mellitus

Diese Studie wird in einem Krankenhaus der Tertiärversorgung, Dr.A.Ramachandran's Diabetes Hospitals, Chennai, durchgeführt. Personen ohne Diabetes in der Vorgeschichte, die ein Diabetes-Screening anstreben, werden zur Teilnahme an der Studie eingeladen und nach Unterzeichnung der Einverständniserklärung anhand des Risikoscores bewertet. Die Patienten, die die Einschlusskriterien erfüllen, werden in diese Studie aufgenommen und es werden zusätzliche Tests durchgeführt. Wir werden auch den Ehepartner, Verwandte oder Freunde des Patienten einladen, die bereit sind, an dieser Studie teilzunehmen.

Vorläufiges Screening: Das Team besteht aus einem wissenschaftlichen Mitarbeiter (Zahnarzt), einem wissenschaftlichen Mitarbeiter, zwei Labortechnikern und einem Laborassistenten. Die Messungen werden während des gesamten Screenings von denselben Teammitgliedern ausgewertet, um mögliche Abweichungen zwischen den Beobachtern auszuschließen. Teilnehmer im Alter von ≥ 35 Jahren, die die Klinik besuchen, werden zu einer Voruntersuchung eingeladen. Gewicht und Größe werden gemessen, wobei die Teilnehmer leichte Kleidung ohne Schuhe tragen. Der BMI wird berechnet (kg/m2). Der Taillenumfang wird in der Mitte zwischen dem unteren Rippenrand und dem Beckenkamm gemessen. Der Blutdruck wird nach einer 5-minütigen Pause mit einem Standard-Quecksilber-Blutdruckmessgerät gemessen. Für die Analyse wird ein Mittelwert der beiden Messwerte verwendet. Vorgeschichte von Bluthochdruck, Borderline-Diabetes und Schwangerschaftsdiabetes wird ermittelt. Die familiäre Vorgeschichte von Diabetes, Herzerkrankungen, Schlaganfall und Bewegungsmangel wird in einem strukturierten Fragebogen erfasst. Wenn der Teilnehmer 2 oder mehr Risikofaktoren hat, wird er nach 75 g oraler Glukose (Accu check performa, Roche Diagnostics) auf Nüchtern- und 2-Stunden-Plasmaglukose getestet.

Die Teilnehmer am nächsten Tag werden anhand der Einschluss- und Ausschlusskriterien in normoglykämische, prädiabetische (IFG/IGT) und neu diagnostizierte Typ-2-Diabetiker kategorisiert. Die ausgewählten Teilnehmer werden einer zahnärztlichen Untersuchung unterzogen, um auf Parodontitis zu prüfen. Anschließend wird von allen Personen eine Speichel- und Nüchternserumprobe zur Bestimmung der Biomarker (Adiponektin, Apelin, Visfatin und Vaspin) entnommen. HbA1c, Lipidprofil und Gamma-Glutamyltransferase (GGT) werden im Nüchternserum analysiert.

In einem Serumröhrchen werden ca. 10 ml Blut gesammelt. Die Trennung der Blutproben erfolgt im zentralen Untersuchungslabor. Blutproben werden getrennt, aliquotiert, gekühlt und sofort zur Biomarker-Analyse bei -70 °C gelagert. HbA1c wird mittels Immunturbidometrie (Tina-Quant II; Roche Diagnostics Corporation, Deutschland) gemessen; ein vom nationalen Glykohämoglobin-Standardisierungsprogramm zertifiziertes Verfahren. Das Nüchtern-Serumlipidprofil (Gesamtcholesterin, Triglyceride und Lipoprotein hoher Dichte, Cholesterin) und die GGT werden mithilfe standardmäßiger enzymatischer Methoden geschätzt. Biochemische Tests werden auf einem Cobas Integra 450 plus (Roche, Deutschland) Autoanalysegerät unter Verwendung von Reagenzien von Roche Diagnostics und geeigneten Qualitätskontrollmethoden (Roche Diagnostics Referenzserum) durchgeführt.

Nicht stimulierte Speichelproben werden in einem Probensammelröhrchen gesammelt. Der Teilnehmer wird gebeten, vor der Speichelentnahme etwa zwei Stunden lang nichts zu essen oder zu trinken. Dies geschieht zwischen 8 und 10 Uhr. Die Probanden werden gebeten, ihren Mund mit Trinkwasser auszuspülen und anschließend den gesamten Speichel in ein Sammelröhrchen auszuspucken. Anschließend wird der Speichel etwa 10 Minuten lang bei 9300 g und 40 °C zentrifugiert und dann bis zur weiteren Verwendung bei -70 °C gelagert.

Speichel und Plasma werden bei Raumtemperatur aufgetaut, um die Biomarker mittels ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) zu messen. Es wird ein kommerzielles ELISA-Kit für humane Biomarker für Serum und Speichel verwendet und der Test gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt. Jede Speichel- und Plasmaprobe desselben Patienten wird im selben Versuchssatz analysiert. Plasmaproben müssen verdünnt werden. Speichelproben werden unverdünnt analysiert.

Die Berichte werden vom Zentrallabor per Kurier an die Teilnehmer versandt. Teilnehmer mit neu diagnostiziertem Diabetes oder unkontrolliertem Diabetes werden zur Behandlung an einen Diabetologen überwiesen und zwei Jahre lang nachbeobachtet. Personen mit Prädiabetes wird empfohlen, ihre körperliche Aktivität und ihre Ernährungsgewohnheiten zu verbessern, und sie werden zwei Jahre lang nachbeobachtet. Teilnehmer mit Parodontitis werden an einen Zahnarzt überwiesen und zwei Jahre lang nachbeobachtet.

Während der Besuche 4 und 6 werden Gewicht, Taillenumfang, BMI und Blutdruck des Teilnehmers gemessen und Laboruntersuchungen wie Fasten und 2 Stunden postprandialer Blutzucker, HbA1c und Lipidprofil durchgeführt. Bei Besuch 6 werden Speichel- und Serumproben des Teilnehmers zur Adipokinmessung entnommen.