Badanie związku adipokin ślinowych ze stanem przedcukrzycowym i cukrzycą typu 2

To badanie jest prowadzone w szpitalu trzeciego stopnia, Dr.A.Ramachandran's Diabetes Hospitals, Chennai. Osoby bez historii cukrzycy, zgłaszające się na badanie przesiewowe w kierunku cukrzycy, zostaną zaproszone do udziału w badaniu i po podpisaniu formularza świadomej zgody zostaną ocenione na podstawie oceny ryzyka. Pacjenci, którzy spełniają kryteria włączenia, zostaną włączeni do tego badania i zostaną wykonane dodatkowe testy. Zaprosimy również małżonka pacjenta, krewnych lub przyjaciół, którzy wyrażą chęć udziału w tym badaniu.

Wstępna selekcja: Zespół składa się z jednego pracownika naukowego (dentysty), jednego pracownika naukowego, dwóch techników laboratoryjnych i jednego asystenta laboratoryjnego. Pomiary będą oceniane przez tych samych członków zespołu podczas całego procesu przesiewowego, aby wyeliminować potencjalne różnice między obserwatorami. Osoby w wieku ≥35 lat, które odwiedzą klinikę, zostaną zaproszone na wstępne badanie przesiewowe. Wagę i wzrost mierzono u uczestników w lekkich ubraniach bez butów. Oblicza się BMI (kg/m2). Obwód talii mierzony jest w połowie odległości między dolnym brzegiem żebra a grzebieniem biodrowym. Ciśnienie krwi mierzy się za pomocą standardowego sfigmomanometru rtęciowego po 5-minutowym odpoczynku. Do analizy wykorzystuje się średnią z dwóch odczytów. Ustalona zostanie wcześniejsza historia nadciśnienia tętniczego, cukrzycy typu borderline i cukrzycy ciążowej. Historia cukrzycy, chorób serca, udaru mózgu i siedzącego trybu życia w rodzinie jest rejestrowana w ustrukturyzowanym kwestionariuszu. Jeśli uczestnik ma 2 lub więcej czynników ryzyka, zostanie zbadany na czczo i 2 godziny po podaniu 75 g glukozy doustnie (Accu check performa, Roche Diagnostics).

Następnego dnia uczestnicy zostaną podzieleni na kategorie na podstawie kryteriów włączenia i wyłączenia jako pacjenci z normoglikemią, stan przedcukrzycowy (IFG/IGT) i nowo zdiagnozowana cukrzyca typu 2. Wybrani uczestnicy zostaną poddani badaniu stomatologicznemu pod kątem zapalenia przyzębia. Następnie od wszystkich osobników pobiera się ślinę i surowicę na czczo w celu oznaczenia biomarkerów (adiponektyny, apeliny, wisfatyny i waspiny). HbA1c, profil lipidowy i gamma-glutamylotransferaza (GGT) są analizowane w surowicy na czczo.

Około 10 ml krwi pobiera się do probówki z surowicą. Separacja próbek krwi odbywa się w centralnym laboratorium badawczym. Próbki krwi rozdziela się, dzieli na porcje, chłodzi i natychmiast przechowuje w temperaturze -70˚C do analizy biomarkerów. HbA1c mierzy się za pomocą immunoturbidometrii (tina-quant II; Roche Diagnostics Corporation, Niemcy); procedura certyfikowana przez krajowy program normalizacji glikohemoglobiny. Profil lipidowy surowicy na czczo (cholesterol całkowity, trójglicerydy i lipoproteiny o dużej gęstości, cholesterol) oraz GGT ocenia się standardowymi metodami enzymatycznymi. Testy biochemiczne przeprowadza się na autoanalizatorze Cobas Integra 450 plus (Roche, Niemcy) przy użyciu odczynników firmy Roche diagnostics, z zastosowaniem odpowiednich metod kontroli jakości (surowica referencyjna Roche diagnostics).

Niestymulowane próbki śliny zostaną pobrane do probówki do pobierania próbek. Uczestnik zostanie poproszony o powstrzymanie się od jedzenia i picia przez około dwie godziny przed pobraniem śliny; odbywa się to około 8:00 - 10:00. Badani zostaną poproszeni o przepłukanie ust wodą pitną, a następnie odkrztuszanie całej śliny do probówki. Ślina jest następnie odwirowywana przy 9300 g w temperaturze 40°C przez około 10 minut, a następnie przechowywana w temperaturze -70°C do dalszego użycia.

Ślina i osocze zostaną rozmrożone w temperaturze pokojowej w celu pomiaru biomarkerów za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA). Stosuje się komercyjny zestaw ELISA do oznaczania ludzkich biomarkerów surowicy i śliny, a test przeprowadza się zgodnie z instrukcjami producenta. Każda próbka śliny i osocza od tego samego pacjenta będzie analizowana w tym samym zestawie doświadczalnym. Próbki osocza wymagają rozcieńczenia. Próbki śliny będą analizowane bez rozcieńczania.

Raporty będą wysyłane z laboratorium centralnego do uczestników za pośrednictwem firmy kurierskiej. Uczestnicy ze świeżo rozpoznaną lub niekontrolowaną cukrzycą zostaną skierowani do diabetologa w celu leczenia i obserwacji przez dwa lata. Osobom ze stanem przedcukrzycowym zaleca się poprawę aktywności fizycznej i nawyków żywieniowych oraz obserwację przez dwa lata. Uczestnicy z zapaleniem przyzębia zostaną skierowani do chirurga stomatologa i będą obserwowani przez dwa lata.

Podczas wizyty 4 i 6 zostanie zmierzona waga uczestnika, obwód talii, BMI, ciśnienie krwi oraz badania laboratoryjne, takie jak poziom glukozy we krwi na czczo i 2 godziny po posiłku, HbA1c i profil lipidowy. Podczas Wizyty 6 od uczestnika pobierane są próbki śliny i surowicy do pomiaru poziomu adipokin.