Estudio de asociación de adipocinas salivales con prediabetes y diabetes mellitus tipo 2

Este estudio se lleva a cabo en un hospital de atención terciaria, Dr.A.Ramachandran's Diabetes Hospitals, Chennai. Las personas sin antecedentes de diabetes que busquen un tamizaje de diabetes serán invitadas a participar en el estudio y luego de firmar el formulario de consentimiento informado serán evaluadas por el puntaje de riesgo. Los pacientes que cumplan con los criterios de inclusión serán inscritos en este estudio y se realizarán pruebas adicionales. También invitaremos al cónyuge del paciente, familiares o amigos que estén dispuestos a participar en este estudio.

Evaluación preliminar: el equipo está compuesto por un investigador asociado (dentista), un investigador asociado, dos técnicos de laboratorio y un asistente de laboratorio. Las mediciones serán evaluadas por los mismos miembros del equipo a lo largo de la selección, para eliminar la posible variación entre observadores. Se invitará a los participantes de ≥35 años que visiten la clínica a someterse a una evaluación preliminar. El peso y la altura se miden con los participantes vistiendo ropa ligera sin zapatos. Se calcula el IMC (kg/m2). La circunferencia de la cintura se mide a mitad de camino entre el margen inferior de la costilla y la cresta ilíaca. La presión arterial se mide con un esfigmomanómetro de mercurio estándar después de un descanso de 5 minutos. Para el análisis se utiliza un promedio de las dos lecturas. Se evaluarán los antecedentes de hipertensión arterial, diabetes borderline y diabetes gestacional. Los antecedentes familiares de diabetes, cardiopatías, accidentes cerebrovasculares y estilo de vida sedentario se registran en un cuestionario estructurado. Si el participante tiene 2 o más factores de riesgo, se le realizará una prueba de glucosa en plasma en ayunas y 2 horas después de 75 g de glucosa oral (Accu check performa, Roche Diagnostics).

Los participantes del día siguiente se clasificarán en función de los criterios de inclusión y exclusión como pacientes normoglucémicos, prediabéticos (IFG/IGT) y diabéticos tipo 2 recién diagnosticados. Los participantes seleccionados se someterán a un examen dental para detectar periodontitis. Luego se obtiene una muestra de suero salival y en ayunas de todos los individuos para la estimación de biomarcadores (adiponectina, apelina, visfatina y vaspina). Se analiza HbA1c, perfil lipídico y gamma-glutamil transferasa (GGT) en suero en ayunas.

Se recogen aproximadamente 10 ml de sangre en un tubo de suero. La separación de muestras de sangre se realiza en el laboratorio central de investigación. Las muestras de sangre se separan, se dividen en alícuotas, se refrigeran y se almacenan inmediatamente a -70 °C para el análisis de biomarcadores. La HbA1c se mide por inmunoturbidometría (tina-quant II; roche diagnostics corporation, alemania); un procedimiento certificado por el programa nacional de estandarización de glicohemoglobina. El perfil de lípidos séricos en ayunas (colesterol total, triglicéridos y lipoproteínas de alta densidad, colesterol) y la GGT se estiman mediante métodos enzimáticos estándar. Los ensayos bioquímicos se realizan en un autoanalizador Cobas Integra 450 plus (Roche, Alemania) utilizando reactivos de Roche Diagnostics, con métodos de control de calidad apropiados (suero de referencia de Roche Diagnostics).

Las muestras de saliva no estimuladas se recogerán en un tubo de recogida de muestras. Se le pedirá al participante que se abstenga de comer o beber durante aproximadamente dos horas antes de la recolección de saliva; se hace alrededor de las 8 am - 10 am. Se les pedirá a los sujetos que se enjuaguen la boca con agua potable y luego que expectoren toda la saliva en un tubo de recolección. Luego, la saliva se centrifuga a 9300 g a 40 C durante aproximadamente 10 minutos y luego se almacena a -70 grados C, hasta su uso posterior.

La saliva y el plasma se descongelarán a temperatura ambiente para la medición de biomarcadores mediante ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). Se utiliza un kit ELISA comercial para biomarcadores humanos para suero y saliva y el ensayo se realiza de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Cada muestra de saliva y plasma del mismo paciente se analizará en el mismo conjunto experimental. Las muestras de plasma requieren dilución. Las muestras de saliva se analizarán sin dilución.

Los informes se enviarán desde el laboratorio central a los participantes por mensajería. Los participantes con diabetes recién diagnosticada o diabetes no controlada serán derivados a un diabetólogo para recibir tratamiento y seguimiento durante dos años. A las personas con prediabetes se les recomendará que mejoren la actividad física y los hábitos alimentarios y se les hará un seguimiento durante dos años. Los participantes con periodontitis serán derivados a un cirujano dental y se les hará un seguimiento durante dos años.

Durante las visitas 4 y 6, se medirán el peso, la circunferencia de la cintura, el IMC y la presión arterial del participante y se realizarán investigaciones de laboratorio como glucosa en sangre en ayunas y posprandial de 2 horas, HbA1c y perfil de lípidos. En la Visita 6, se recolectan muestras de saliva y suero del participante para medir las adipoquinas.