Estudo da associação de adipocinas salivares com pré-diabetes e diabetes mellitus tipo 2

Este estudo é realizado em um hospital terciário, Hospitais de Diabetes do Dr.A.Ramachandran, Chennai. As pessoas sem antecedentes de diabetes, que desejarem realizar o rastreio de diabetes, serão convidadas a participar do estudo e após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido serão avaliadas pelo escore de risco. Os pacientes que preencherem os critérios de inclusão serão incluídos neste estudo e testes adicionais serão feitos. Também convidaremos o cônjuge, parentes ou amigos do paciente que estejam dispostos a participar deste estudo.

Triagem preliminar: A equipe é composta por um pesquisador associado (dentista), um pesquisador associado, dois técnicos de laboratório e um assistente de laboratório. As medidas serão avaliadas pelos mesmos membros da equipe durante a triagem, para eliminar possíveis variações interobservadores. Os participantes com idade ≥35 anos que visitam a clínica serão convidados a passar por uma triagem preliminar. O peso e a altura são medidos com os participantes vestindo roupas leves e sem sapatos. O IMC é calculado (kg/m2). A circunferência da cintura é medida a meio caminho entre a margem inferior da costela e a crista ilíaca. A pressão arterial é medida usando um esfigmomanômetro de mercúrio padrão após um descanso de 5 minutos. Uma média das duas leituras é usada para a análise. A história prévia de hipertensão, diabetes limítrofe e diabetes gestacional será verificada. História familiar de diabetes, doença cardíaca, acidente vascular cerebral e estilo de vida sedentário são registrados em um questionário estruturado. Se o participante tiver 2 ou mais fatores de risco, ele será testado para glicemia de jejum e 2h após 75g de glicose oral (Accu check performa, Roche Diagnostics).

Os participantes do dia seguinte serão categorizados com base nos critérios de inclusão e exclusão como normoglicêmicos, pré-diabéticos (IFG/IGT) e diabéticos tipo 2 recém-diagnosticados. Os participantes selecionados passarão por exame odontológico para verificação de periodontite. Em seguida, amostras de soro salivar e de jejum são obtidas de todos os indivíduos para estimativa de biomarcadores (adiponectina, apelina, visfatina e vaspina). HbA1c, perfil lipídico e gama-glutamil transferase (GGT) são analisados ​​no soro em jejum.

Aproximadamente 10 ml de sangue são coletados em um tubo de soro. A separação da amostra de sangue é realizada no laboratório central de investigação. As amostras de sangue são separadas, divididas em alíquotas, refrigeradas e imediatamente armazenadas a -70˚C para análise de biomarcadores. A HbA1c é medida por imunoturbidometria (tina-quant II; roche diagnostics Corporation, Alemanha); um procedimento certificado pelo programa nacional de padronização da glicohemoglobina. O perfil lipídico sérico em jejum (colesterol total, triglicerídeos e lipoproteína de alta densidade, colesterol) e GGT é estimado usando métodos enzimáticos padrão. Os ensaios bioquímicos são realizados em um analisador automático Cobas Integra 450 plus (Roche, Alemanha) usando reagentes da Roche diagnostics, com métodos de controle de qualidade apropriados (soro de referência da Roche diagnostics).

Amostras salivares não estimuladas serão coletadas em um tubo de coleta de amostras. O participante será solicitado a abster-se de comer ou beber por cerca de duas horas antes da coleta de saliva; é feito por volta das 8h - 10h. Os indivíduos serão solicitados a enxaguar a boca com água potável e, em seguida, a expectorar toda a saliva em um tubo de coleta. A saliva é então centrifugada a 9300g a 40°C por cerca de 10 minutos e então armazenada a -70°C, até o uso posterior.

Saliva e plasma serão descongelados em temperatura ambiente para dosagem de biomarcadores por ensaio imunoenzimático (ELISA). Um kit ELISA comercial para biomarcadores humanos para soro e saliva é usado e o ensaio é conduzido de acordo com as instruções do fabricante. Cada amostra de saliva e plasma do mesmo paciente será analisada no mesmo conjunto experimental. As amostras de plasma requerem diluição. As amostras de saliva serão analisadas sem diluição.

Os relatórios serão enviados do laboratório central para os participantes por correio. Os participantes com diabetes recém-diagnosticado ou diabetes não controlado serão encaminhados a um diabetologista para tratamento e acompanhados por dois anos. Indivíduos com pré-diabetes serão aconselhados a melhorar a atividade física e os hábitos alimentares e acompanhados por dois anos. Os participantes com periodontite serão encaminhados para um cirurgião-dentista e acompanhados por dois anos.

Durante as visitas 4 e 6, serão medidos o peso, a circunferência da cintura, o IMC, a pressão arterial e as investigações laboratoriais, como glicemia em jejum e 2 horas pós-prandial, HbA1c e perfil lipídico. Na Visita 6, amostras de saliva e soro do participante são coletadas para medição de adipocinas.