Mikrobiální odběr vzorků kazivého dentinu

Navrhuje se, aby s informovaným souhlasem a ve sterilním operačním prostředí (kontrolovaný, mikronově filtrovaný proud vzduchu okolního prostředí, navíc ke konvenční sterilizaci nástrojů) byli dobrovolníci zubních pacientů odstraněni buď oblasti se zkaženou strukturou zubů, nebo výplně s opakovaným kazem za použití konvenční, rutinní postupy, které budou zahrnovat: lokální anestezii; izolace zubů pomocí kofferdamu; odstranění povrchového kazu, oslabené struktury zubu nebo defektních výplňových materiálů rotačními nástroji pro řezání zubů; a poté ruční odstranění změkčeného dentinu pomocí sterilních rýpadel s ostrou lžičkou. Hranice odstranění dentinu bude určena klinickým odhadem tvrdosti zubu, tj. za použití současné konvenční a etické praxe. Tento poslední krok, odstranění tkáně řízené odhadovanou tvrdostí, je, jak je popsáno výše, všeobecně uznávaným standardem.

Po odstranění bude exponovaný povrch dentinu vizuálně vyšetřen 15X operačním mikroskopem, aby se detekovaly jakékoli oblasti se změněnou barvou dentinu. Jakékoli takové oblasti budou mikrovzorky odebrány pomocí ultrapomalých rotačních řezných nástrojů o průměru 0,2 mm a odstranění výsledných dentinových vloček sterilními vlákny. Každá preparovaná dutina bude poté obnovena pomocí konvenčních zubních výplňových materiálů a technik.

Ihned po odstranění bude každá vločka dentinu zvážena, umístěna do bakteriálního transportního média a poté sonikována. Transportní médium bude rozděleno na dvě části a oddělené vzorky budou přidány do bakteriálního růstového média za anaerobních a aerobních růstových podmínek. Jakékoli detekované životaschopné mikroorganismy budou identifikovány jak konvenčními technikami pokovování za použití vizuální identifikace, tak komerční laboratoří pomocí analýzy RNA.