Amostragem microbiana de dentina cariada

Propõe-se que, com consentimento informado e em um ambiente operacional estéril (controlado, fluxo de ar filtrado em nível de mícron, além da esterilização convencional de instrumentos), pacientes odontológicos voluntários terão áreas de estrutura dentária cariada ou restaurações defeituosas de cárie recorrentes removidas usando procedimentos convencionais de rotina, que incluirão: anestesia local; isolamento dentário com dique de borracha; remoção de cárie superficial, estrutura dentária enfraquecida ou materiais de preenchimento defeituosos com instrumentos rotatórios de corte dentário; e então remoção da dentina amolecida usando escavadeiras de colher afiada estéreis, manualmente. O limite de remoção de dentina será determinado pela estimativa clínica da dureza do dente, ou seja, usando a prática convencional e ética atual. Esta última etapa, remoção de tecido guiada pela dureza estimada, é conforme descrito acima do padrão universalmente aceito.

Após a remoção, a superfície de dentina exposta será examinada visualmente com um microscópio operacional de 15X para detectar quaisquer áreas de dentina descolorida. Todas essas áreas serão micro-amostradas usando instrumentos de corte rotativos de 0,2 mm de diâmetro de velocidade ultra lenta e remoção dos flocos de dentina resultantes com fibras estéreis. Cada cavidade preparada será então restaurada usando materiais e técnicas convencionais de obturação dentária.

Imediatamente após a remoção, cada floco de dentina será pesado, colocado em meio de transporte bacteriano e então sonicado. O meio de transporte será dividido em dois, e amostras separadas serão adicionadas ao meio de crescimento bacteriano em condições de crescimento anaeróbico e aeróbico. Qualquer microrganismo viável detectado será identificado tanto por técnicas convencionais de plaqueamento usando identificação visual, quanto por um laboratório comercial usando análise de RNA.