Bezbuněčné cirkulující nukleové kyseliny jako nová diagnostika nádorů ze vzorků lidské plazmy.

Bezbuněčné cirkulující volné nukleové kyseliny jsou novým substrátem pro laboratorní diagnostiku v řadě lékařských oblastí včetně onkologie, transfuzního lékařství, gynekologie/porodnictví, zánětlivých a autoimunitních onemocnění atd. Bezbuněčné nukleové kyseliny mají různé kvality. V onkologii se ukázalo, že časná detekce bezbuněčných nukleových kyselin pocházejících z nádoru předchází diagnostické detekci klinického relapsu, jak se provádí zobrazovacími technikami nebo klinickými symptomy, o 6-8 měsíců.

Exozomy jsou malé vezikuly lipidové dvouvrstvé membrány (30-100 nm), které se uvolňují ze všech typů buněk do extracelulárního prostoru. Tyto drobné membránové vezikuly přenášejí signály zprostředkované EV prostřednictvím proteinů, lipidů, nukleových kyselin a cukrů a jedinečný molekulární vzorec tohoto balíčku řídí typ extracelulárního signálu, který má být přenášen do cílových buněk. Zájem o exosomy sahá od jejich způsobu působení a různých funkcí v těle až po praktičtější aplikace, jako je vývoj biomarkerů založených na analýze jejich obsahu RNA a proteinů a jejich použití v klinické diagnostice. Bylo navrženo, že mikro RNA jsou přenášeny přes exozomy do recipientních buněk a mohou tam zprostředkovat represi svých mRNA cílů.

Použití vysoce nákladných cílených terapií (např. inhibitory tyrozinkinázy nebo inhibitory PARP) mohou během terapie zastarat v důsledku změn v mutačním molekulárním profilu maligního nádoru. Pokud včasná detekce bezbuněčných nukleových kyselin naznačuje selhání terapie, může být v budoucnu možná nová stratifikace pacienta a změněné modality terapie, což pomůže prodloužit celkové přežití pacientů s nádorem.

Cíle výzkumu:

• Izolovat exosomy jako stabilní zdroj bezbuněčných nukleových kyselin.
• Provést profilování proteinů na izolovaných exozomech.
• Izolovat nukleové kyseliny z exozomů pro analýzu.
• Definovat a vyvinout standardy a protokoly pro analýzu bezbuněčných nukleových kyselin zejména s ohledem na epigenetické změny s důrazem na metylaci DNA.
• Optimalizace preanalytického procesu pro zlepšení preanalytických aspektů testů.
• Testovat stabilitu methylované ve srovnání s nemethylovanou cirkulující DNA za různých preanalytických podmínek.