Celvrije circulerende nucleïnezuren als nieuwe tumordiagnostiek uit menselijke plasmamonsters.

Celvrije circulerende vrije nucleïnezuren zijn nieuwe substraten voor laboratoriumdiagnostiek op een aantal medische gebieden, waaronder oncologie, transfusiegeneeskunde, gynaecologie/verloskunde, ontstekings- en auto-immuunziekten enz. Er zijn verschillende kwaliteiten van celvrije nucleïnezuren. In de oncologie is aangetoond dat de vroege detectie van celvrije nucleïnezuren afkomstig van de tumor 6-8 maanden voorafgaat aan de diagnostische detectie van klinische terugval, zoals gedaan door middel van beeldvormende technieken of klinische symptomen.

Exosomen zijn kleine, dubbellaagse membraanblaasjes (30-100 nm) die door alle celtypen in de extracellulaire ruimte worden afgegeven. Deze minuscule membraanblaasjes zenden EV-gemedieerde signalen uit door eiwitten, lipiden, nucleïnezuren en suikers, en het unieke moleculaire patroon van dit pakket stuurt het type extracellulair signaal dat naar doelcellen moet worden verzonden. De belangstelling voor exosomen varieert van hun werkingsmechanisme en verschillende functies in het lichaam tot meer praktische toepassingen zoals de ontwikkeling van biomarkers op basis van analyse van hun RNA- en eiwitgehalte en hun gebruik in klinische diagnostiek. Er werd voorgesteld dat micro-RNA's via exosomen worden overgedragen naar ontvangende cellen en daar de onderdrukking van hun mRNA-doelen kunnen bemiddelen.

Het gebruik van zeer dure gerichte therapieën (bijv. tyrosinekinaseremmers of PARP-remmers) kunnen tijdens de behandeling achterhaald raken als gevolg van veranderingen in het mutatiemoleculaire profiel van de kwaadaardige tumor. Als vroege detectie van celvrije nucleïnezuren wijst op therapiefalen, is in de toekomst een nieuwe stratificatie van de patiënt en gewijzigde therapiemodaliteiten mogelijk, waardoor de algehele overleving van tumorpatiënten kan worden verlengd.

Doelstellingen van het onderzoek:

• Om exosomen te isoleren als een stabiele bron van celvrije nucleïnezuren.
• Om eiwitprofilering uit te voeren op de geïsoleerde exosomen.
• Om nucleïnezuren uit exosomen te isoleren voor analyse.
• Het definiëren en ontwikkelen van standaarden en protocollen voor analyse van celvrije nucleïnezuren, met name met betrekking tot epigenetische veranderingen met de nadruk op DNA-methylatie.
• Optimalisatie van het pre-analytische proces om de pre-analytische aspecten van assays te verbeteren.
• Om de stabiliteit van gemethyleerd vergeleken met niet-gemethyleerd circulerend DNA te testen onder verschillende pre-analytische omstandigheden.