Acidi nucleici circolanti liberi dalle cellule come nuova diagnostica tumorale da campioni di plasma umano.

Gli acidi nucleici liberi circolanti nelle cellule sono nuovi substrati per la diagnostica di laboratorio in una serie di aree mediche tra cui oncologia, medicina trasfusionale, ginecologia/ostetricia, malattie infiammatorie e autoimmuni, ecc. Esistono varie qualità di acidi nucleici liberi nelle cellule. In oncologia, è stato dimostrato che la diagnosi precoce degli acidi nucleici liberi cellulari originati dal tumore precede di 6-8 mesi la rilevazione diagnostica della recidiva clinica effettuata mediante tecniche di imaging o sintomi clinici.

Gli esosomi sono piccole vescicole di membrana a doppio strato lipidico (30-100 nm) che vengono rilasciate da tutti i tipi di cellule nello spazio extracellulare. Queste minuscole vescicole di membrana trasmettono segnali mediati da EV da proteine, lipidi, acidi nucleici e zuccheri e il modello molecolare unico di questo pacchetto dirige il tipo di segnale extracellulare da trasmettere alle cellule bersaglio. L'interesse per gli esosomi va dalla loro modalità di azione e varie funzioni nel corpo ad applicazioni più pratiche come lo sviluppo di biomarcatori basati sull'analisi del loro contenuto di RNA e proteine ​​e il loro uso nella diagnostica clinica. È stato proposto che i micro RNA vengano trasferiti attraverso gli esosomi alle cellule riceventi e possano lì mediare la repressione dei loro bersagli mRNA.

L'uso di terapie mirate molto costose (ad es. inibitori della tirosina chinasi o inibitori di PARP) possono diventare obsoleti durante la terapia a causa di cambiamenti nel profilo molecolare mutazionale del tumore maligno. Infatti, se la diagnosi precoce degli acidi nucleici liberi delle cellule suggerisce il fallimento della terapia, in futuro potrebbero essere possibili una nuova stratificazione del paziente e modalità terapeutiche modificate, contribuendo così a prolungare la sopravvivenza globale dei pazienti affetti da tumore.

Obiettivi della ricerca:

• Isolare gli esosomi come fonte stabile di acidi nucleici liberi cellulari.
• Eseguire il profilo proteico sugli esosomi isolati.
• Isolare gli acidi nucleici dagli esosomi per l'analisi.
• Definire e sviluppare standard e protocolli per l'analisi degli acidi nucleici liberi delle cellule, in particolare per quanto riguarda le alterazioni epigenetiche con particolare attenzione alla metilazione del DNA.
• Ottimizzazione del processo pre-analitico per migliorare gli aspetti pre-analitici dei dosaggi.
• Testare la stabilità del DNA circolante metilato rispetto a quello non metilato in varie condizioni pre-analitiche.