Бесклеточные циркулирующие нуклеиновые кислоты как новая диагностика опухолей из образцов плазмы человека.

Бесклеточные циркулирующие свободные нуклеиновые кислоты являются новыми субстратами для лабораторной диагностики в ряде областей медицины, включая онкологию, трансфузионную медицину, гинекологию/акушерство, воспалительные и аутоиммунные заболевания и т. д. Бесклеточные нуклеиновые кислоты бывают различного качества. В онкологии было показано, что раннее обнаружение внеклеточных нуклеиновых кислот, происходящих из опухоли, предшествует диагностическому выявлению клинического рецидива с помощью методов визуализации или клинических симптомов на 6-8 месяцев.

Экзосомы представляют собой небольшие липидные двухслойные мембранные везикулы (30-100 нм), которые высвобождаются из всех типов клеток во внеклеточное пространство. Эти крошечные мембранные везикулы передают сигналы, опосредованные EV, с помощью белков, липидов, нуклеиновых кислот и сахаров, а уникальный молекулярный рисунок этого пакета определяет тип внеклеточного сигнала, который должен быть передан клеткам-мишеням. Интерес к экзосомам варьируется от их способа действия и различных функций в организме до более практических применений, таких как разработка биомаркеров на основе анализа содержания их РНК и белка и их использование в клинической диагностике. Было высказано предположение, что микроРНК переносятся через экзосомы в клетки-реципиенты и могут там опосредовать репрессию их мРНК-мишеней.

Использование дорогостоящих таргетных методов лечения (например, ингибиторы тирозинкиназы или ингибиторы PARP) могут устареть во время терапии из-за изменений в мутационном молекулярном профиле злокачественной опухоли. Действительно, если раннее обнаружение внеклеточных нуклеиновых кислот свидетельствует о неэффективности терапии, в будущем могут быть возможны новая стратификация пациента и изменение методов терапии, что поможет продлить общую выживаемость пациентов с опухолями.

Цели исследования:

• Выделить экзосомы как стабильный источник внеклеточных нуклеиновых кислот.
• Выполнить профилирование белка на изолированных экзосомах.
• Выделить нуклеиновые кислоты из экзосом для анализа.
• Определить и разработать стандарты и протоколы анализа бесклеточных нуклеиновых кислот, особенно в отношении эпигенетических изменений с акцентом на метилирование ДНК.
• Оптимизация преаналитического процесса для улучшения преаналитических аспектов анализов.
• Проверить стабильность метилированной циркулирующей ДНК по сравнению с неметилированной в различных преаналитических условиях.