Ácidos Nucleicos Circulantes Livres em Células como Novos Diagnósticos de Tumores a Partir de Amostras de Plasma Humano.

Os ácidos nucleicos livres de circulação livre de células são novos substratos para diagnósticos laboratoriais em várias áreas médicas, incluindo oncologia, medicina transfusional, ginecologia/obstetrícia, doenças inflamatórias e autoimunes, etc. Existem várias qualidades de ácidos nucleicos livres de células. Em oncologia, foi demonstrado que a detecção precoce de ácidos nucléicos livres de células originários do tumor precede a detecção diagnóstica de recidiva clínica por meio de técnicas de imagem ou sintomas clínicos em 6-8 meses.

Os exossomos são pequenas vesículas de membrana de bicamada lipídica (30-100 nm) que são liberadas de todos os tipos de células no espaço extracelular. Essas minúsculas vesículas de membrana transmitem sinais mediados por EV por proteínas, lipídios, ácidos nucléicos e açúcares, e o padrão molecular único desse pacote direciona o tipo de sinal extracelular a ser transmitido às células-alvo. O interesse nos exossomos varia desde seu modo de ação e várias funções no corpo até aplicações mais práticas, como o desenvolvimento de biomarcadores com base na análise de seu conteúdo de RNA e proteínas e seu uso em diagnósticos clínicos. Foi proposto que os micro RNAs são transferidos através de exossomos para as células receptoras e podem mediar a repressão de seus alvos de mRNA.

O uso de terapias direcionadas altamente caras (por exemplo, inibidores de tirosina quinase ou inibidores de PARP) podem tornar-se obsoletos durante a terapia devido a alterações no perfil molecular mutacional do tumor maligno. De fato, se a detecção precoce de ácidos nucleicos livres de células sugerir falha na terapia, uma nova estratificação do paciente e modalidades de terapia alteradas podem ser possíveis no futuro, ajudando assim a prolongar a sobrevida geral dos pacientes com tumor.

Objetivos da Pesquisa:

• Para isolar exossomos como uma fonte estável de ácidos nucléicos livres de células.
• Para realizar o perfil de proteína nos exossomos isolados.
• Para isolar ácidos nucleicos de exossomos para análise.
• Definir e desenvolver padrões e protocolos para análise de ácidos nucléicos livres de células, particularmente no que diz respeito a alterações epigenéticas com ênfase na metilação do DNA.
• Otimização do processo pré-analítico para melhorar os aspectos pré-analíticos dos ensaios.
• Testar a estabilidade do DNA circulante metilado em comparação com o não metilado sob várias condições pré-analíticas.