Wolne od komórek krążące kwasy nukleinowe jako nowa diagnostyka nowotworów z próbek ludzkiego osocza.

Wolne od komórek krążące wolne kwasy nukleinowe to nowe substraty do diagnostyki laboratoryjnej w wielu dziedzinach medycyny, w tym w onkologii, transfuzjologii, ginekologii/położnictwie, chorobach zapalnych i autoimmunologicznych itp. Istnieją różne właściwości wolnych od komórek kwasów nukleinowych. W onkologii wykazano, że wczesne wykrycie wolnych od komórek kwasów nukleinowych pochodzących z guza poprzedza diagnostyczne wykrycie wznowy klinicznej za pomocą technik obrazowania lub objawów klinicznych o 6-8 miesięcy.

Egzosomy to małe, dwuwarstwowe pęcherzyki błony lipidowej (30-100 nm), które są uwalniane ze wszystkich typów komórek do przestrzeni pozakomórkowej. Te maleńkie pęcherzyki błonowe przekazują sygnały, w których pośredniczy EV, za pośrednictwem białek, lipidów, kwasów nukleinowych i cukrów, a unikalny wzór molekularny tego pakietu kieruje rodzajem sygnału zewnątrzkomórkowego, który ma być przekazywany do komórek docelowych. Zainteresowanie egzosomami rozciąga się od ich sposobu działania i różnych funkcji w organizmie po bardziej praktyczne zastosowania, takie jak opracowywanie biomarkerów na podstawie analizy ich zawartości RNA i białek oraz ich zastosowanie w diagnostyce klinicznej. Zaproponowano, że mikroRNA są przenoszone przez egzosomy do komórek biorców i mogą tam pośredniczyć w represji ich docelowych mRNA.

Stosowanie bardzo kosztownych terapii celowanych (np. inhibitory kinazy tyrozynowej lub inhibitory PARP) mogą stać się przestarzałe w trakcie terapii z powodu zmian w mutacyjnym profilu molekularnym guza złośliwego. Rzeczywiście, jeśli wczesne wykrycie wolnych od komórek kwasów nukleinowych sugeruje niepowodzenie terapii, w przyszłości możliwe może być nowe rozwarstwienie pacjenta i zmienione metody terapii, pomagając w ten sposób przedłużyć całkowite przeżycie pacjentów z nowotworem.

Cele badań:

• Wyizolowanie egzosomów jako stabilnego źródła wolnych od komórek kwasów nukleinowych.
• Wykonanie profilowania białek na wyizolowanych egzosomach.
• Wyizolowanie kwasów nukleinowych z egzosomów do analizy.
• Zdefiniowanie i opracowanie standardów i protokołów analizy wolnych od komórek kwasów nukleinowych, w szczególności w odniesieniu do zmian epigenetycznych, z naciskiem na metylację DNA.
• Optymalizacja procesu przedanalitycznego w celu poprawy przedanalitycznych aspektów testów.
• Aby przetestować stabilność metylowanego w porównaniu z niemetylowanym krążącym DNA w różnych warunkach przedanalitycznych.