Aminokyselinová biologická dostupnost fava fazolí (Leg4Life)

Cílem je zjistit nutriční kvalitu bílkovin z favabean u zdravých lidí, zejména z hlediska stravitelnosti aminokyselin. Ileální stravitelnost se stanovuje v ileální trávenině odebrané postprandiálně naso-ileální sondou. Favabeans jsou přirozeně značeny v 15N, aby bylo možné sledovat dietní dusík a aminokyseliny ve vzorcích.

Etické a regulační aspekty:

Protokol byl předložen Etické komisi ke schválení a Francouzské agentuře pro léčiva a zdraví ke správnímu schválení. Správa osobních údajů bude probíhat v souladu s nařízením o ochraně osobních údajů („nařízení č. 2018-493 ze dne 20. června 2018“).

Jídlo:

Jídlo se bude skládat z 250 g uvařeného a oloupaného favabean, což poskytne 20 g bílkovin. Pro optimalizaci organoleptických vlastností pokrmu budou realizovány senzorické testy. Fazole označené 15N se uvaří ve vodě se solí. Ráno v den experimentu se část fava fazolí zahřeje.

Dobrovolníci:

Do studie bude zahrnuto osm předmětů. Vyšetřovatelé plánují naverbovat přibližně 16 dobrovolníků, aby se přizpůsobili obvyklým 50% výpadkům.

Týden před experimentem budou dobrovolníci dodržovat standardní dietu přizpůsobenou jejich tělesné hmotnosti, aby kontrolovali příjem bílkovin (1,3 g bílkovin/kg tělesné hmotnosti). Budou požádáni, aby konzumovali jednu až 3 porce favabeanů za týden.

Dobrovolníci dorazí do Centra pro výzkum lidské výživy v nemocnici Avicenne ráno před dnem experimentu. Budou vybaveny střevní trubicí s dvojitým lumenem, které bude umožněno postupovat střevním traktem po dobu 24 hodin. Jeden z lumen je rentgenově neprůhledný a slouží k perfuzi nevstřebatelného maker ve střevě (metoda pomalého markeru). Druhý lumen je určen pro kontinuální aspiraci efluentů, 15 cm pod perfuzním místem. Měření neabsorbovatelného markeru v odpadních vodách umožňuje stanovení průtoku odpadních vod.

V den experimentu bude poloha trubice zkontrolována rentgenově, aby se ověřilo její umístění na terminálním ileu. Do žíly na předloktí bude zaveden katétr pro odběr krve. Perfuze neabsorbovatelného markeru, PEG-4000 (20 g/l), začne při průtoku 1 ml/min. Střevní průtok a bazální ileální vzorek budou odebírány během 30 minut. Bude odebrán vzorek bazální plazmy.

Poté, v t=0, dobrovolníci vypijí testovací jídlo. Až do t=8h bude střevní obsah nepřetržitě shromažďován odsáváním a shromažďován každých 30 minut. Krev bude odebírána každých 30 minut během 4 hodin a poté každou hodinu. Moč bude shromažďována každé 2 hodiny po dobu 8 hodin.

Subjekty budou odebírat vzorky stolice doma během 48 hodin po jídle. Stoličky budou odeslány do Finska.

Měření:

V digestátu:

PEG-4000 turbidimetrickou metodou, celkové obohacení N a 15N pomocí EA-IRMS, koncentrace aminokyselin pomocí UPLC (po kyselé hydrolýze HCl 6N při 110°C po dobu 24h), obohacení 15N aminokyselin pomocí GC-c-IRMS (po čištění na kationtoměničová pryskyřice a derivatizace).

V plazmě:

Glukóza, močovina (kolorimetrické metody), inzulín (ELISA), koncentrace aminokyselin (UPLC), 15N obohacení plazmatických proteinů, močoviny a volných aminokyselin (EA-IRMS, po purifikaci na katexu a derivatizaci).

V moči:

Močovina (kolorimetrická metoda) a 15N močovina (EA-IRMS, po čištění na kationtoměničové pryskyřici a derivatizaci).

Ve stolici:

Mikrobiální DNA.

výsledky:

Reálná ileální stravitelnost bílkovin a aminokyselin (trávicí ztráty), Postprandiální deaminace (metabolické ztráty), Čistá postprandiální utilizace bílkovin, Složení mikrobioty.