Biodostępność aminokwasów fasoli Fava (Leg4Life)

Celem jest określenie jakości odżywczej białka z bobu u zdrowych ludzi, zwłaszcza pod względem strawności aminokwasów. Strawność jelita krętego oznacza się w treści pokarmowej jelita krętego pobranej poposiłkowo przez sondę nosowo-jelitową. Fasola favabean jest wewnętrznie znakowana 15N w celu śledzenia azotu i aminokwasów w próbkach.

Aspekty etyczne i regulacyjne:

Protokół został przedłożony Komisji Etycznej do zatwierdzenia oraz do Francuskiej Agencji ds. Leków i Zdrowia w celu uzyskania zgody administracyjnej. Zarządzanie danymi osobowymi odbywać się będzie zgodnie z rozporządzeniem o ochronie danych osobowych ("rozporządzenie nr 2018-493 z dnia 20 czerwca 2018 r.").

Posiłek:

Posiłek będzie się składał z 250 g ugotowanego i obranego bobu, który dostarczy 20 g białka. Zrealizowane zostaną testy sensoryczne w celu optymalizacji właściwości organoleptycznych posiłku. Fasola oznaczona 15N będzie gotowana w wodzie z solą. Rankiem w dniu doświadczenia porcja bobu zostanie podgrzana.

Wolontariusze:

Badaniem zostanie objętych osiem przedmiotów. Badacze planują zrekrutować około 16 ochotników, aby uwzględnić 50% przypadków rezygnacji.

Tydzień przed eksperymentem ochotnicy będą stosować standardową dietę dostosowaną do ich masy ciała, aby kontrolować spożycie białka (1,3 g białka/kg masy ciała). Zostaną poproszeni o spożywanie od jednej do trzech porcji bobu w ciągu tygodnia.

Wolontariusze przybędą do Centrum Badań Żywienia Człowieka Szpitala Avicenne rano przed dniem eksperymentu. Zostaną wyposażone w dwuświatłową rurkę jelitową, która będzie mogła przechodzić przez przewód pokarmowy przez 24h. Jedno ze świateł jest nieprzepuszczalne dla promieniowania i służy do perfuzji niewchłanialnego preparatu w jelicie (metoda powolnego markera). Drugi kanał jest przeznaczony do ciągłego zasysania ścieków, 15 cm poniżej miejsca perfuzji. Pomiar markera niewchłanialnego w ściekach pozwala na określenie natężenia przepływu ścieku.

W dniu eksperymentu pozycja rurki zostanie sprawdzona za pomocą radiografii, aby zweryfikować jej położenie w końcowym odcinku jelita krętego. Cewnik zostanie wprowadzony do żyły przedramienia w celu pobrania krwi. Perfuzja niewchłanialnego markera PEG-4000 (20 g/l) rozpocznie się przy szybkości przepływu 1 ml/min. Przepływ jelitowy i próbka podstawy jelita krętego będą pobierane w ciągu 30 minut. Zostanie pobrana próbka podstawowego osocza.

Następnie, w t=0, ochotnicy wypiją posiłek testowy. Do t=8h zawartość jelita będzie stale zbierana przez aspirację i łączona co 30 minut. Krew będzie pobierana co 30 minut przez 4 godziny, a następnie co godzinę. Mocz będzie pobierany co 2 godziny przez 8 godzin.

Badani pobiorą próbki kału w domu w ciągu 48 godzin po posiłku. Taborety zostaną wysłane do Finlandii.

Wymiary:

W treści pokarmowej:

PEG-4000 metodą turbidymetryczną, wzbogacenie całkowitym N i 15N metodą EA-IRMS, stężenia aminokwasów metodą UPLC (po hydrolizie kwasowej HCl 6N w 110°C przez 24h), wzbogacenie w 15N aminokwasami metodą GC-c-IRMS (po oczyszczeniu na żywica kationowymienna i derywatyzacja).

w osoczu:

Glukoza, mocznik (metody kolorymetryczne), insulina (ELISA), stężenia aminokwasów (UPLC), wzbogacenie 15N w białko osocza, mocznik i wolne aminokwasy (EA-IRMS, po oczyszczeniu na żywicy kationowymiennej i derywatyzacji).

W moczu:

Mocznik (metoda kolorymetryczna) i mocznik 15N (EA-IRMS, po oczyszczeniu na żywicy kationowymiennej i derywatyzacji).

W stolcach:

DNA drobnoustrojów.

Wyniki:

Rzeczywista strawność białka i aminokwasów w jelicie krętym (straty trawienne), deaminacja poposiłkowa (straty metaboliczne), poposiłkowe wykorzystanie białka netto, skład mikroflory.