Biodisponibilité des acides aminés des fèves (Leg4Life)

L'objectif est de déterminer la qualité nutritionnelle des protéines de féverole chez l'homme sain, notamment en termes de digestibilité des acides aminés. La digestibilité iléale est déterminée à partir de digesta iléal recueillis après le repas avec une sonde naso-iléale. Les fèves sont intrinsèquement marquées en 15N afin de suivre l'azote alimentaire et les acides aminés dans les échantillons.

Aspects éthiques et réglementaires :

Le protocole a été soumis au Comité d'éthique pour approbation et à l'Agence française du médicament et de la santé pour autorisation administrative. La gestion des données personnelles sera conforme au règlement sur la protection des données personnelles (" règlement n° 2018-493 du 20 juin 2018").

Repas:

Le repas sera composé de 250 g de féveroles cuites et épluchées, pour apporter 20 g de protéines. Des tests sensoriels seront réalisés pour optimiser les propriétés organoleptiques du repas. Le haricot étiqueté 15N sera bouilli dans de l'eau avec du sel. Le matin de l'expérience, la portion de fève sera réchauffée.

Bénévoles:

Huit sujets seront inclus dans l'étude. Les enquêteurs prévoient de recruter environ 16 volontaires pour tenir compte des 50% habituels d'abandons.

Une semaine avant l'expérience, les volontaires suivront un régime standard adapté à leur poids corporel pour contrôler leur apport en protéines (1,3 g de protéines/kg de poids corporel). Il leur sera demandé de consommer une à 3 portions de féverole dans la semaine.

Les volontaires arriveront au Centre de Recherche en Nutrition Humaine de l'Hôpital Avicenne le matin précédant le jour de l'expérimentation. Ils seront équipés d'un tube intestinal à double lumière qui leur permettra de progresser dans le tractus intestinal pendant 24h. L'une des lumières est radio-opaque et sert à perfuser un marqueur non résorbable dans l'intestin (méthode des marqueurs lents). L'autre lumière est dédiée à l'aspiration continue des effluents, 15 cm sous le site de perfusion. La mesure du marqueur non résorbable dans les effluents permet de déterminer le débit des effluents.

Le jour de l'expérience, la position du tube sera vérifiée par radiographie pour vérifier son emplacement au niveau de l'iléon terminal. Un cathéter sera inséré dans la veine de l'avant-bras pour le prélèvement sanguin. La perfusion du marqueur non résorbable, PEG-4000 (20g/l), commencera à un débit de 1ml/min. Le flux intestinal et l'échantillon iléal basal seront collectés pendant 30 min. Un échantillon de plasma basal sera prélevé.

Puis, à t=0, les volontaires boiront le repas-test. Jusqu'à t=8h, le contenu intestinal sera collecté en continu par aspiration et regroupé toutes les 30 minutes. Le sang sera prélevé toutes les 30 minutes pendant 4h et toutes les heures par la suite. Les urines seront recueillies toutes les 2 h pendant 8 h.

Les sujets recueilleront des échantillons de selles à la maison pendant les 48 h après le repas. Les tabourets seront envoyés en Finlande.

Des mesures:

Dans le digeste :

PEG-4000 par méthode turbidimétrique, enrichissement en N total et 15N par EA-IRMS, concentrations en acides aminés par UPLC (après hydrolyse acide HCl 6N à 110°C pendant 24h), enrichissement en acides aminés 15N par GC-c-IRMS (après purification sur résine échangeuse de cations et dérivatisation).

Dans le plasma :

Glucose, urée (méthodes colorimétriques), insuline (ELISA), concentrations en acides aminés (UPLC), enrichissement 15N en protéines plasmatiques, urée et acides aminés libres (EA-IRMS, après purification sur résine échangeuse de cations et dérivatisation).

Dans les urines :

Urée (méthode colorimétrique) et urée 15N (EA-IRMS, après purification sur résine échangeuse de cations et dérivatisation).

Dans les selles :

ADN microbien.

Résultats :

Digestibilité iléale réelle des protéines et des acides aminés (pertes digestives), Désamination postprandiale (pertes métaboliques), Utilisation nette des protéines postprandiales, Composition du microbiote.