Aminosäure-Bioverfügbarkeit von Ackerbohnen (Leg4Life)

Ziel ist es, die ernährungsphysiologische Qualität von Proteinen aus Favabohnen bei gesunden Menschen zu bestimmen, insbesondere im Hinblick auf die Verdaulichkeit von Aminosäuren. Die ileale Verdaulichkeit wird in ilealem Digesta bestimmt, das postprandial mit einer naso-ilealen Sonde gesammelt wird. Die Ackerbohnen sind intrinsisch in 15 N markiert, um den Nahrungsstickstoff und die Aminosäuren in den Proben zu verfolgen.

Ethische und regulatorische Aspekte:

Das Protokoll wurde der Ethikkommission zur Genehmigung und der französischen Agentur für Arzneimittel und Gesundheit zur behördlichen Genehmigung vorgelegt. Die Verwaltung personenbezogener Daten erfolgt gemäß der Verordnung zum Schutz personenbezogener Daten („Verordnung Nr. 2018-493 vom 20. Juni 2018“).

Mahlzeit:

Die Mahlzeit besteht aus 250 g gekochter und geschälter Saubohne, um 20 g Protein bereitzustellen. Es werden sensorische Tests durchgeführt, um die organoleptischen Eigenschaften des Gerichts zu optimieren. 15N beschriftete Bohne wird in Wasser mit Salz gekocht. Am Morgen des Experiments wird die Portion Ackerbohnen aufgewärmt.

Freiwillige:

Acht Probanden werden in die Studie aufgenommen. Die Ermittler planen, etwa 16 Freiwillige zu rekrutieren, um die üblichen 50 % Ausfälle zu bewältigen.

Eine Woche vor dem Experiment folgen die Freiwilligen einer an ihr Körpergewicht angepassten Standarddiät, um ihre Proteinzufuhr zu kontrollieren (1,3 g Protein/kg Körpergewicht). Sie werden gebeten, in der Woche eine bis drei Portionen Favabean zu verzehren.

Die Freiwilligen kommen am Morgen vor dem Tag des Experiments im Human Nutrition Research Center des Avicenne Hospital an. Sie werden mit einem doppellumigen Darmschlauch ausgestattet, der 24 Stunden lang durch den Darmtrakt wandern kann. Eines der Lumen ist strahlenundurchlässig und dient zur Perfusion eines nicht resorbierbaren Markers im Darm (Slow-Marker-Methode). Das andere Lumen dient der kontinuierlichen Aspiration der Abwässer, 15 cm unterhalb der Perfusionsstelle. Die Messung des nicht-resorbierbaren Markers in den Abwässern ermöglicht die Bestimmung der Abwasserflussrate.

Am Tag des Experiments wird die Position des Tubus durch Radiographie überprüft, um seine Lage am terminalen Ileum zu verifizieren. Zur Blutentnahme wird ein Katheter in die Unterarmvene eingeführt. Die Perfusion des nicht resorbierbaren Markers PEG-4000 (20 g/l) beginnt mit einer Flussrate von 1 ml/min. Der Darmfluss und die basale Ileumprobe werden während 30 Minuten gesammelt. Es wird eine Basalplasmaprobe entnommen.

Dann, bei t = 0, werden die Freiwilligen die Testmahlzeit trinken. Bis t = 8 h wird der Darminhalt kontinuierlich durch Aspiration gesammelt und alle 30 Minuten gepoolt. Blut wird alle 30 Minuten während 4 Stunden und danach stündlich entnommen. Der Urin wird alle 2 h für 8 h gesammelt.

Die Probanden sammeln während der 48 h nach der Mahlzeit Stuhlproben zu Hause. Hocker werden nach Finnland geschickt.

Messungen:

Im Digest:

PEG-4000 durch turbidimetrisches Verfahren, Gesamt-N- und 15N-Anreicherung durch EA-IRMS, Aminosäurekonzentrationen durch UPLC (nach Säurehydrolyse HCl 6N bei 110°C für 24h), 15N-Aminosäuren-Anreicherung durch GC-c-IRMS (nach Reinigung an Kationenaustauscherharz und Derivatisierung).

Im Plasma:

Glukose, Harnstoff (kolorimetrische Methoden), Insulin (ELISA), Aminosäurekonzentrationen (UPLC), 15N-Anreicherung an Plasmaprotein, Harnstoff und freien Aminosäuren (EA-IRMS, nach Reinigung auf Kationenaustauscherharz und Derivatisierung).

Im Urin:

Harnstoff (kolorimetrisches Verfahren) und 15 N Harnstoff (EA-IRMS, nach Reinigung auf Kationenaustauscherharz und Derivatisierung).

Im Stuhlgang:

Mikrobielle DNA.

Ergebnisse:

Reale ileale Verdaulichkeit von Protein und Aminosäuren (Verdauungsverluste), postprandiale Desaminierung (metabolische Verluste), postprandiale Netto-Proteinverwertung, Mikrobiota-Zusammensetzung.