Biodisponibilità aminoacidica delle fave (Leg4Life)

L'obiettivo è determinare la qualità nutrizionale delle proteine ​​delle fave negli esseri umani sani, soprattutto in termini di digeribilità degli amminoacidi. La digeribilità ileale è determinata nel digestato ileale raccolto postprandialmente con un tubo naso-ileale. Le fave sono intrinsecamente etichettate in 15N per tenere traccia dell'azoto alimentare e degli amminoacidi nei campioni.

Aspetti etici e normativi:

Il protocollo è stato sottoposto all'approvazione del Comitato Etico e all'Agenzia francese per i farmaci e la salute per l'autorizzazione amministrativa. La gestione dei dati personali avverrà in conformità con il regolamento sulla protezione dei dati personali ("regolamento n° 2018-493 del 20 giugno 2018").

Pasto:

Il pasto consisterà in 250 g di fave cotte e sbucciate, per fornire 20 g di proteine. Saranno realizzati test sensoriali per ottimizzare le proprietà organolettiche del pasto. Il fagiolo etichettato 15N sarà bollito in acqua con sale. La mattina dell'esperimento, la porzione di fava verrà scaldata.

Volontari:

Otto soggetti saranno inclusi nello studio. Gli investigatori prevedono di reclutare circa 16 volontari per far fronte al consueto 50% di abbandoni.

Una settimana prima dell'esperimento, i volontari seguiranno una dieta standard adattata al loro peso corporeo per controllare l'assunzione di proteine ​​(1,3 g di proteine/kg di peso corporeo). Verrà chiesto loro di consumare da una a 3 porzioni di fava alla settimana.

I volontari arriveranno al Centro di Ricerca sulla Nutrizione Umana dell'Ospedale di Avicenne la mattina prima del giorno dell'esperimento. Saranno dotati di un tubo intestinale a doppio lume che potrà progredire attraverso il tratto intestinale per 24 ore. Uno dei lumi è radiopaco e serve a perfondere un creatore non assorbibile nell'intestino (metodo del marcatore lento). L'altro lume è dedicato all'aspirazione continua degli effluenti, 15 cm al di sotto del sito di perfusione. La misura del marcatore non assorbibile negli effluenti consente la determinazione della portata dell'effluente.

Il giorno dell'esperimento, la posizione del tubo verrà controllata mediante radiografia per verificarne l'ubicazione all'ileo terminale. Un catetere verrà inserito nella vena dell'avambraccio per il prelievo di sangue. La perfusione del marcatore non assorbibile, PEG-4000 (20 g/l), inizierà a una velocità di flusso di 1 ml/min. Il flusso intestinale e il campione ileale basale saranno raccolti per 30 min. Verrà prelevato un campione di plasma basale.

Quindi, a t=0, i volontari berranno il pasto-test. Fino a t=8h, il contenuto intestinale sarà continuamente raccolto mediante aspirazione e raggruppato ogni 30 minuti. Il sangue verrà prelevato ogni 30 minuti per 4 ore e successivamente ogni ora. Le urine saranno raccolte ogni 2 ore per 8 ore.

I soggetti raccoglieranno campioni di feci a casa durante le 48 ore dopo il pasto. Gli sgabelli saranno spediti in Finlandia.

Misure:

Nel digestivo:

PEG-4000 con metodo turbidimetrico, arricchimento di N totale e 15N mediante EA-IRMS, concentrazioni di aminoacidi mediante UPLC (dopo idrolisi acida HCl 6N a 110°C per 24h), arricchimento di aminoacidi 15N mediante GC-c-IRMS (dopo purificazione su resina a scambio cationico e derivatizzazione).

Nel plasma:

Glucosio, urea (metodi colorimetrici), insulina (ELISA), concentrazioni di aminoacidi (UPLC), arricchimento 15N in proteine ​​plasmatiche, urea e aminoacidi liberi (EA-IRMS, previa purificazione su resina a scambio cationico e derivatizzazione).

Nelle urine:

Urea (metodo colorimetrico) e urea 15N (EA-IRMS, dopo purificazione su resina a scambio cationico e derivatizzazione).

Nelle feci:

DNA microbico.

Risultati:

Digeribilità ileale reale di proteine ​​e aminoacidi (perdite digestive), Deaminazione postprandiale (perdite metaboliche), Utilizzo netto postprandiale delle proteine, Composizione del microbiota.