Biodisponibilidad de aminoácidos de habas (Leg4Life)

El objetivo es determinar la calidad nutricional de la proteína de haba en humanos sanos, especialmente en términos de digestibilidad de aminoácidos. La digestibilidad ileal se determina en digesta ileal recolectada posprandialmente con un tubo naso-ileal. Las habas están intrínsecamente etiquetadas en 15N para rastrear el nitrógeno dietético y los aminoácidos en las muestras.

Aspectos éticos y normativos:

El protocolo fue presentado al Comité de Ética para su aprobación ya la Agencia Francesa de Medicamentos y Salud para la autorización administrativa. El tratamiento de los datos personales se realizará de conformidad con el reglamento de protección de datos personales ("reglamento n° 2018-493 del 20 de junio de 2018").

Comida:

La comida consistirá en 250 g de habas cocidas y peladas, para aportar 20 g de proteína. Se realizarán pruebas sensoriales para optimizar las propiedades organolépticas de la harina. El frijol etiquetado 15N se hervirá en agua con sal. En la mañana del experimento, se calentará la porción de habas.

Voluntarios:

Se incluirán ocho sujetos en el estudio. Los investigadores planean reclutar alrededor de 16 voluntarios para adaptarse a los abandonos habituales del 50 %.

Una semana antes del experimento, los voluntarios seguirán una dieta estándar adaptada a su peso corporal para controlar su aporte proteico (1,3 g de proteína/kg de peso corporal). Se les pedirá que consuman de una a 3 porciones de habas en la semana.

Los voluntarios llegarán al Centro de Investigación de Nutrición Humana del Hospital Avicenne la mañana anterior al día del experimento. Estarán equipados con un tubo intestinal de doble luz que se dejará avanzar por el tracto intestinal durante 24h. Uno de los lúmenes es radiopaco y sirve para perfundir un fabricante no absorbible en el intestino (método de marcador lento). El otro lumen está dedicado a la aspiración continua de los efluentes, 15 cm por debajo del sitio de perfusión. La medición del marcador no absorbible en los efluentes permite determinar el caudal del efluente.

El día del experimento se comprobará radiográficamente la posición del tubo para verificar su ubicación en el íleon terminal. Se insertará un catéter en la vena del antebrazo para tomar muestras de sangre. La perfusión del marcador no absorbible, PEG-4000 (20 g/l), comenzará a un caudal de 1 ml/min. Se recogerá el flujo intestinal y la muestra de íleon basal durante 30 min. Se tomará una muestra de plasma basal.

Luego, en t=0, los voluntarios beberán la comida de prueba. Hasta t=8h, el contenido intestinal se recogerá continuamente mediante aspiración y se agrupará cada 30 minutos. Se tomarán muestras de sangre cada 30 minutos durante 4 hy cada hora a partir de entonces. La orina se recogerá cada 2 h durante 8 h.

Los sujetos recogerán muestras de heces en casa durante las 48 h posteriores a la comida. Las heces se enviarán a Finlandia.

Mediciones:

En la digesta:

PEG-4000 por método turbidimétrico, enriquecimiento de N total y 15N por EA-IRMS, concentraciones de aminoácidos por UPLC (después de la hidrólisis ácida HCl 6N a 110°C durante 24h), enriquecimiento de 15N aminoácidos por GC-c-IRMS (después de la purificación en resina de intercambio catiónico y derivatización).

En el plasma:

Glucosa, urea (métodos colorimétricos), insulina (ELISA), concentraciones de aminoácidos (UPLC), enriquecimiento 15N en proteínas plasmáticas, urea y aminoácidos libres (EA-IRMS, previa purificación en resina de intercambio catiónico y derivatización).

En la orina:

Urea (método colorimétrico) y urea 15N (EA-IRMS, tras purificación en resina de intercambio catiónico y derivatización).

En las heces:

ADN microbiano.

Resultados:

Digestibilidad ileal real de proteínas y aminoácidos (pérdidas digestivas), Desaminación posprandial (pérdidas metabólicas), Utilización neta de proteínas posprandiales, Composición de la microbiota.