Návrh studie diacereinu u pacientů s Covid-19

Design studie Toto je randomizovaná, placebem kontrolovaná, dvojitě zaslepená pilotní studie navržená k ověření, zda diacerein zmírňuje systémovou zánětlivou odpověď u hospitalizovaných pacientů s COVID-19. Tato studie byla přezkoumána a schválena etickou komisí Státní univerzity v Campinas (CAAE: 50440921.6.0000.5404).

Populace studie Do studie bude zařazeno 40 pacientů s potvrzenou diagnózou COVID-19. Pacienti budou identifikováni jako pacienti přijatí do nemocnice Estadual Sumaré (Sumaré, Brazílie) a klinické nemocnice Unicamp (Campinas, Brazílie). Po zařazení budou pacienti randomizováni (n=20 na skupinu) způsobem 1:1, aby dostávali buď diacerein 50 mg nebo placebo každých 12 hodin po dobu 10 dnů.

Nábor Všichni pacienti přijatí s COVID-19, kteří splňují kritéria pro zařazení a vyloučení, budou pozváni k účasti ve studii. Po přečtení a podepsání formuláře informovaného souhlasu bude pacient náhodně rozdělen do dvou léčebných ramen.

Randomizace a zaslepení Po zařazení budou pacienti randomizováni (n=20 na skupinu) v poměru 1:1, aby dostávali buď diacerein 50 mg nebo placebo každých 12 hodin po dobu 10 dnů. Jako randomizační systém bude použita výzkumná platforma elektronického sběru dat (REDCap). Pacienti, vyšetřovatelé a další podpůrný personál budou vůči experimentální terapii zaslepeni. Studovaný lék, diacerein (Artrodar®-kapsle 50 mg) a placebo tobolky (laktóza a stearát hořečnatý), budou mít podobnou velikost a vzhled, aby se zachovalo oslepení. Všechny laboratorní analýzy budou prováděny naslepo k léčbě. K identifikaci studovaného léku dojde až po uzamčení datové sady.

Zkušební intervence Po randomizaci dostanou pacienti přidělení k aktivní léčbě 1 tobolku diacereinu (Artrodar®, 50 mg) perorálně každých 12 hodin po dobu 10 dnů. Pacienti randomizovaní do skupiny s placebem dostanou 1 tobolku (laktóza a stearát hořečnatý) perorálně každých 12 hodin po dobu 10 dnů. U účastníků, kteří prodělali akutní poškození ledvin s mírou odhadované rychlosti glomerulární filtrace, bude upravena dávka studijního léku (diacerein nebo placebo) na 1 tobolku každých 24 hodin (snížení diacereinu na 50 mg každých 24 hodin místo každých 12 hodin). <30 ml/min nebo vyžadující renální substituční terapii. Pokud je nutná renální substituční terapie, bude studovaný lék podán ihned po dialýze.

Pokud je pacient intubován, tobolky diacereinu nebo placeba se otevřou a jejich obsah se vloží do předem vyčištěných a řádně označených nylonových sáčků. Obsah sáčku se rozpustí v 10 až 20 ml destilované vody v 20ml injekční stříkačce v době podání ošetřovatelkou za přítomnosti výzkumníka. Intervence ve studii nezdrží ani neovlivní klinickou péči o pacienta v souladu se zásadami místního centra.

Laboratorní analýzy Při přijetí bude odebrán první vzorek krve před první dávkou studovaného léku (den 0) a poté tři a deset hodin po podání léku. Vzorky krve budou také odebrány druhý (den 2), pátý (den 5) a desátý (den 10) den léčby. S výjimkou vzorků získaných při příjmu budou vzorky krve odebírány po 12hodinovém hladovění. Ihned po odběru budou všechny vzorky odstředěny při 3500 otáčkách za minutu a zmraženy v kapalném dusíku pro jednodávkové zpracování. Zánětlivé cytokiny (c-reaktivní protein, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IFN-α2, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, IP-10 GM-CSF ) budou měřeny multiplexním imunotestem (Bio-Plex 200®, Bio-Rad) stejně jako měření dalších markerů, jako je troponin-T a D-dimer.

Koncové body studie Koncovými body jsou změna sérových hladin cytokinů, troponinu-T a D-dimeru ode dne 0 do dne 5 hospitalizace a ode dne 0 do dne 10, stejně jako plocha pod křivkou s ohledem na všechna měření od Den 0 až den 10.

Sekundární cílové parametry zahrnují (i) čas do klinického zhoršení definovaný jako čas od randomizace do mortality nebo zhoršení klinické progrese Světové zdravotnické organizace (WHO), hodnocené zvýšením o dva body v této škále; ii) kumulativní výskyt nežádoucích příhod; iii) kumulativní výskyt závažných nežádoucích příhod.

Biologická dostupnost diacereinu Biologická dostupnost diacereinu a jeho aktivního metabolitu, rheinu, bude hodnocena v séru pacientů randomizovaných k léčbě diacereinem, aby byla zajištěna biologická dostupnost u pacientů s COVID-19. Budou použity vzorky ze dne 0 a časových bodů: krátce před, tři a deset hodin po podání studovaného léku. Všem pacientům budou odebrány tyto vzorky, aby se zachovalo zaslepení studie. Koncentrace diacereinu a rheinu v séru budou stanoveny pomocí kapalinové chromatografie-tandemové hmotnostní spektrometrie na konci studie.

Výpočet velikosti vzorku Protože nejsou k dispozici žádné údaje o účinku diacereinu na zánětlivou odpověď u pacientů s COVID-19, velikost vzorku byla empiricky stanovena na 40 subjektech v konzervativním očekávání malé velikosti standardizovaného účinku (0,2). Proto jsme se rozhodli provést pilotní vzorek se 40 pacienty (n=20 na rameno studie) s výsledky ze systémové zánětlivé odpovědi a bezpečnosti.

Populace analýzy bezpečnosti Aplikovala se na všechny randomizované pacienty, kteří dostali alespoň jednu dávku diacereinu. Hodnocení bezpečnosti bude založeno na kumulativním výskytu bezpečnostních výsledků, nežádoucích příhod, fyzikálních vyšetření, vitálních funkcí a bezpečnostních laboratorních testů. Primárním cílem bezpečnosti bude doba mezi randomizací a prvním výskytem.

Statistická analýza Spojité proměnné budou reprezentovány mediánem a souvisejícím mezikvartilovým rozsahem. Kategorické proměnné budou prezentovány jako absolutní četnost (n) a relativní četnost (%). Souhrnná statistická data (průměr, směrodatná odchylka, medián, minimum a maximum) poskytne léčebná skupina pro demografické a základní charakteristiky pomocí testu chí-kvadrát (např. kategorické proměnné) a modelu jednosměrné analýzy rozptylu (ANOVA). s léčbou jako faktorem (např. spojité proměnné). Kromě toho budou demografické a výchozí charakteristiky porovnány napříč léčebnými skupinami pro populaci se záměrem léčit (ITT). Význam tohoto testu bude použit jako počáteční hodnocení spokojenosti s randomizací.

Koncentrace plazmatických prozánětlivých cytokinů budou považovány za koncové body účinnosti. Skupiny budou porovnány podle změn v přijetí (den 0) oproti dnům hodnocení (den 2, den 5 a den 10). Také srovnání mezi plochami pod křivkou pro každý z parametrů ode dne 0 do dne 10. Spojité proměnné s normálním a neparametrickým rozdělením budou porovnány analýzou kovariance (ANCOVA) nebo analýzou pořadí rozptylu (RANKOVA) upravenými o výchozí hodnoty pro zmírnění regrese směrem k průměru.