Disegno dello studio della diacereina nei pazienti con Covid-19

Disegno dello studio Questo è uno studio pilota randomizzato, controllato con placebo, in doppio cieco, progettato per verificare se la diacereina attenua la risposta infiammatoria sistemica nei pazienti ospedalizzati con COVID-19. Questo studio è stato esaminato e approvato dal Comitato Etico dell'Università Statale di Campinas (CAAE: 50440921.6.0000.5404).

Popolazione dello studio Quaranta pazienti con una diagnosi confermata di COVID-19 saranno arruolati nello studio. I pazienti saranno identificati come quelli ricoverati all'Hospital Estadual Sumaré (Sumaré, Brasile) e all'Unicamp Clinical Hospital (Campinas, Brasile). Dopo l'arruolamento, i pazienti saranno randomizzati (n=20 per gruppo) in un rapporto 1:1 per ricevere il trattamento con diacereina 50 mg o placebo ogni 12 ore per 10 giorni.

Reclutamento Tutti i pazienti ricoverati con COVID-19 che soddisfano i criteri di inclusione ed esclusione saranno invitati a partecipare allo studio. Dopo aver letto e firmato il modulo di consenso informato, il paziente verrà assegnato in modo casuale a due bracci di trattamento.

Randomizzazione e accecamento Dopo l'arruolamento, i pazienti saranno randomizzati (n=20 per gruppo) 1:1 per ricevere diacereina 50 mg o placebo ogni 12 ore per 10 giorni. La piattaforma di acquisizione elettronica dei dati di ricerca (REDCap) verrà utilizzata come sistema di randomizzazione. Pazienti, ricercatori e altro personale di supporto saranno ciechi rispetto alla terapia sperimentale. Il farmaco in studio, la diacereina (capsule Artrodar® da 50 mg) e le capsule placebo (lattosio e magnesio stearato), saranno simili per dimensioni e aspetto per mantenere l'accecamento. Tutte le analisi di laboratorio verranno eseguite in cieco rispetto al trattamento. L'identificazione del farmaco in studio avverrà solo dopo aver bloccato il set di dati.

Intervento di prova Dopo la randomizzazione, i pazienti assegnati al trattamento attivo riceveranno 1 capsula di diacereina (Artrodar®, 50 mg) per via orale ogni 12 ore per 10 giorni. I pazienti randomizzati al gruppo placebo riceveranno 1 capsula (lattosio e magnesio stearato) per via orale ogni 12 ore per 10 giorni. Ci sarà un aggiustamento della dose del farmaco in studio (diacereina o placebo) a 1 capsula ogni 24 ore (riduzione della diacereina a 50 mg ogni 24 ore anziché ogni 12 ore) nei partecipanti che soffrono di danno renale acuto con un tasso di filtrazione glomerulare stimato <30 ml/min o che richiedono una terapia renale sostitutiva. Se è necessaria una terapia renale sostitutiva, il farmaco in studio verrà somministrato immediatamente dopo la dialisi.

Se il paziente è intubato, le capsule di diacereina o placebo verranno aperte e il loro contenuto verrà inserito in bustine di nylon precedentemente pulite e opportunamente identificate. Il contenuto della bustina verrà sciolto in 10-20 ml di acqua distillata in una siringa da 20 ml al momento della somministrazione da parte dell'infermiere in presenza di un ricercatore. L'intervento dello studio non ritarderà né influirà sulla gestione clinica del paziente in conformità con le politiche del centro locale.

Analisi di laboratorio Al momento del ricovero, il primo campione di sangue sarà raccolto prima della prima dose del farmaco in studio (giorno 0), e poi tre e dieci ore dopo la somministrazione del farmaco. I campioni di sangue verranno raccolti anche il secondo (Giorno 2), il quinto (Giorno 5) e il decimo (Giorno 10) giorno di trattamento. Ad eccezione dei campioni ottenuti al momento del ricovero, i campioni di sangue verranno raccolti dopo un digiuno di 12 ore. Immediatamente dopo la raccolta, tutti i campioni saranno centrifugati a 3.500 rpm e congelati in azoto liquido per l'elaborazione in batch singolo. Citochine infiammatorie (proteina c-reattiva, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IFN-α2, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, IP-10 GM-CSF ) saranno misurati mediante saggio immunologico multiplex (Bio-Plex 200®, Bio-Rad) così come altri marcatori come le misurazioni della troponina-T e del D-dimero.

Endpoint dello studio Gli endpoint sono la variazione dei livelli sierici di citochine, troponina-T e D-dimero dal giorno 0 al giorno 5 di ospedalizzazione e dal giorno 0 al giorno 10, nonché l'area sotto la curva considerando tutte le misurazioni dal Dal giorno 0 al giorno 10.

Gli endpoint secondari includono (i) il tempo al deterioramento clinico definito come il tempo dalla randomizzazione alla mortalità o al peggioramento della scala di progressione clinica dell'Organizzazione mondiale della sanità (OMS), valutato dall'aumento di due punti in questa scala; (ii) incidenza cumulativa di eventi avversi; (iii) incidenza cumulativa di eventi avversi gravi.

Biodisponibilità della diacereina La biodisponibilità della diacereina e del suo metabolita attivo, la reina, sarà valutata nel siero di pazienti randomizzati al trattamento con diacereina al fine di assicurare la biodisponibilità nei pazienti COVID-19. Verranno utilizzati campioni del giorno 0 e punti temporali: poco prima, tre e dieci ore dopo la somministrazione del farmaco in studio. Tutti i pazienti riceveranno questi campioni raccolti per mantenere lo studio in cieco. Le concentrazioni sieriche di diacereina e reina saranno determinate mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem alla fine dello studio.

Calcolo della dimensione del campione Poiché non sono disponibili dati sull'effetto della diacereina sulla risposta infiammatoria nei pazienti con COVID-19, la dimensione del campione è stata stabilita empiricamente a 40 soggetti in un'aspettativa conservativa di una piccola dimensione dell'effetto standardizzata (0,2). Pertanto, abbiamo deciso di eseguire un campione pilota con 40 pazienti (n=20 per braccio dello studio) con esiti di risposta infiammatoria sistemica e sicurezza.

Popolazione dell'analisi di sicurezza applicata a tutti i pazienti randomizzati che hanno ricevuto almeno una dose di diacereina. La valutazione della sicurezza si baserà sull'incidenza cumulativa di esiti di sicurezza, eventi avversi, esami fisici, segni vitali e test di laboratorio di sicurezza. L'endpoint primario di sicurezza sarà il tempo che intercorre tra la randomizzazione e la prima occorrenza.

Analisi statistica Le variabili continue saranno rappresentate dalla mediana e dall'intervallo interquartile associato. Le variabili categoriche saranno presentate come frequenza assoluta (n) e frequenza relativa (%). I dati statistici riassuntivi (media, deviazione standard, mediana, minimo e massimo) saranno forniti dal gruppo di trattamento per le caratteristiche demografiche e basali utilizzando un test del chi-quadrato (ad es. variabili categoriche) e un modello di analisi della varianza unidirezionale (ANOVA) con il trattamento come fattore (ad esempio, variabili continue). Inoltre, i dati demografici e le caratteristiche di base saranno confrontati tra i gruppi di trattamento per l'intenzione di trattare la popolazione (ITT). Il significato di questo test sarà utilizzato come valutazione iniziale per la soddisfazione della randomizzazione.

Le concentrazioni di citochine pro-infiammatorie plasmatiche saranno considerate come endpoint di efficacia. I gruppi verranno confrontati in base ai cambiamenti nell'ammissione (giorno 0) rispetto ai giorni di valutazione (giorno 2, giorno 5 e giorno 10). Inoltre, confronto tra le aree sotto la curva per ciascuno dei parametri dal giorno 0 al giorno 10. Le variabili continue con distribuzione normale e non parametrica saranno confrontate mediante analisi della covarianza (ANCOVA) o mediante analisi del rango della varianza (RANKOVA) aggiustate dai valori basali per mitigare la regressione verso la media.