Undersøgelsesdesign af Diacerein hos patienter med Covid-19

Undersøgelsesdesign Dette er et randomiseret, placebokontrolleret, dobbelt-blindt forsøg pilotundersøgelse designet til at verificere, om diacerein dæmper systemisk inflammatorisk respons hos indlagte patienter med COVID-19. Denne undersøgelse er blevet gennemgået og godkendt af den etiske komité ved State University of Campinas (CAAE: 50440921.6.0000.5404).

Undersøgelsespopulation Fyrre patienter med en bekræftet diagnose af COVID-19 vil blive tilmeldt undersøgelsen. Patienterne vil blive identificeret som dem, der er indlagt på enten Hospital Estadual Sumaré (Sumaré, Brasilien) og Unicamp Clinical Hospital (Campinas, Brasilien). Efter tilmelding vil patienter blive randomiseret (n=20 pr. gruppe) i en 1:1 måde til at modtage enten diacerein 50 mg eller placebobehandling hver 12. time i 10 dage.

Rekruttering Alle patienter indlagt med COVID-19, som opfylder inklusions- og eksklusionskriterierne, vil blive inviteret til at deltage i undersøgelsen. Efter at have læst og underskrevet den informerede samtykkeerklæring vil patienten blive tilfældigt fordelt i to behandlingsarme.

Randomisering og blinding Efter indskrivning vil patienter blive randomiseret (n=20 pr. gruppe) 1:1 til at modtage enten diacerein 50 mg eller placebobehandling hver 12. time i 10 dage. Forskningsplatformen for elektronisk datafangst (REDCap) vil blive brugt som et randomiseringssystem. Patienter, efterforskere og andet støttepersonale vil blive blindet for den eksperimentelle terapi. Undersøgelseslægemidlet, diacerein (Artrodar®-kapsler 50 mg) og placebokapsler (lactose og magnesiumstearat), vil være ens i størrelse og udseende for at opretholde blænding. Alle laboratorieanalyser vil blive udført blindet for behandlingen. Identifikation af undersøgelseslægemidlet vil kun ske efter låsning af datasættet.

Forsøgsintervention Efter randomisering vil patienter, der er allokeret til den aktive behandling, modtage 1 kapsel diacerein (Artrodar®, 50 mg) oralt hver 12. time i 10 dage. Patienter randomiseret til placebogruppen vil modtage 1 kapsel (lactose og magnesiumstearat) oralt hver 12. time i 10 dage. Der vil være en dosisjustering af undersøgelsesmedicin (diacerein eller placebo) til 1 kapsel hver 24. time (reduceret diacerein til 50 mg hver 24. time i stedet for hver 12. time) hos deltagere, som oplever akut nyreskade med en hastighed på estimeret glomerulær filtrationshastighed <30 ml/min eller kræver nyreudskiftningsterapi. Hvis nyreudskiftningsterapi er påkrævet, vil undersøgelseslægemidlet blive administreret umiddelbart efter dialyse.

Hvis patienten intuberes, vil diacerein- eller placebokapslerne blive åbnet, og deres indhold vil blive anbragt i tidligere rensede og korrekt identificerede nylonposer. Posens indhold vil blive opløst i 10 til 20 ml destilleret vand i en 20 ml sprøjte på tidspunktet for administration af sygeplejersken i nærværelse af en forsker. Forsøgsinterventionen vil ikke forsinke eller påvirke patientens kliniske ledelse i overensstemmelse med lokale centerpolitikker.

Laboratorieanalyser Ved indlæggelsen vil den første blodprøve blive udtaget før den første dosis af forsøgslægemidlet (dag 0), og derefter tre og ti timer efter lægemidlets administration. Blodprøver vil også blive indsamlet på den anden (dag 2), femte (dag 5) og tiende (dag 10) dag af behandling. Med undtagelse af prøver opnået ved indlæggelsen vil blodprøver blive udtaget efter 12 timers faste. Umiddelbart efter indsamling vil alle prøver blive centrifugeret ved 3.500 rpm og frosset i flydende nitrogen til enkelt batchbehandling. Inflammatoriske cytokiner (c-reaktivt protein, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IFN-α2, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, IP-10 GM-CSF ) vil blive målt ved multipleks immunoassay (Bio-Plex 200®, Bio-Rad) samt andre markører såsom troponin-T og D-dimer målinger.

Undersøgelsens endepunkter Endpoints er ændringen i serumniveauerne af cytokiner, troponin-T og D-dimer fra dag 0 til dag 5 af indlæggelsen og fra dag 0 til dag 10, samt arealet under kurven i betragtning af alle målinger fra Dag 0 til dag 10.

Sekundære endepunkter inkluderer (i) tid til klinisk forværring defineret som tid fra randomisering til dødelighed eller forværring af Verdenssundhedsorganisationens (WHO) kliniske progressionsskala, vurderet ved en stigning på to point i denne skala; (ii) kumulativ forekomst af uønskede hændelser; (iii) kumulativ forekomst af alvorlige bivirkninger.

Diacereins biotilgængelighed Biotilgængeligheden af ​​diacerein og dets aktive metabolit, rhein, vil blive evalueret i serum fra patienter randomiseret til diacereinbehandling for at sikre biotilgængeligheden hos COVID-19-patienter. Det vil blive brugt prøver fra dag 0 og tidspunkter: kort før, tre og ti timer efter studiets lægemiddeladministration. Alle patienter vil få disse prøver indsamlet for at opretholde undersøgelsesblænding. Serum diacerein og rhein koncentrationer vil blive bestemt ved væskekromatografi-tandem massespektrometri ved afslutningen af ​​undersøgelsen.

Prøvestørrelsesberegning Da der ikke er tilgængelige data om effekten af ​​diacerein på det inflammatoriske respons hos patienter med COVID-19, blev prøvestørrelsen empirisk fastlagt ved 40 forsøgspersoner i en konservativ forventning om en lille standardiseret effektstørrelse (0,2). Derfor besluttede vi at udføre en pilotprøve med 40 patienter (n=20 pr. arm af undersøgelsen) med resultater fra systemisk inflammatorisk respons og sikkerhed.

Sikkerhedsanalysepopulationen anvendes på alle randomiserede patienter, som modtog mindst én dosis diacerein. Sikkerhedsvurderingen vil være baseret på den kumulative forekomst af sikkerhedsresultater, uønskede hændelser, fysiske undersøgelser, vitale tegn og sikkerhedslaboratorietests. Det primære sikkerhedsendepunkt vil være tiden mellem randomisering og den første forekomst.

Statistisk analyse Kontinuerlige variable vil blive repræsenteret af medianen og det tilhørende interkvartilområde. Kategoriske variable vil blive præsenteret som absolut frekvens (n) og relativ frekvens (%). Sammenfattende statistiske data (middelværdi, standardafvigelse, median, minimum og maksimum) vil blive leveret af behandlingsgruppen for demografiske og baseline-karakteristika ved hjælp af en chi-kvadrat-test (f.eks. kategoriske variable) og en-vejs variansanalyse (ANOVA) model med behandling som faktor (f.eks. kontinuerte variable). Derudover vil demografi og baseline-karakteristika blive sammenlignet på tværs af behandlingsgrupper for intention to treat-populationen (ITT). Betydningen af ​​denne test vil blive brugt som en indledende vurdering for tilfredsstillelsen af ​​randomisering.

Koncentrationer af plasma pro-inflammatoriske cytokiner vil blive betragtet som effektmål. Grupperne vil blive sammenlignet med ændringerne i indlæggelse (dag 0) versus vurderingsdage (dag 2, dag 5 og dag 10). Også sammenligning mellem arealerne under kurven for hver af parametrene fra dag 0 til dag 10. Kontinuerlige variable med normal og ikke-parametrisk fordeling vil blive sammenlignet ved analyse af kovarians (ANCOVA) eller ved analyse af variansrang (RANKOVA) justeret med basislinjeværdier for at afbøde regression mod middelværdien.