Diseño de estudio de la diacereína en pacientes con Covid-19

Diseño del estudio Este es un estudio piloto aleatorizado, controlado con placebo y doble ciego diseñado para verificar si la diacereína atenúa la respuesta inflamatoria sistémica en pacientes hospitalizados con COVID-19. Este estudio fue revisado y aprobado por el Comité de Ética de la Universidad Estadual de Campinas (CAAE: 50440921.6.0000.5404).

Población del estudio Cuarenta pacientes con un diagnóstico confirmado de COVID-19 se inscribirán en el estudio. Los pacientes serán identificados como aquellos ingresados ​​en el Hospital Estadual Sumaré (Sumaré, Brasil) y en el Hospital Clínico Unicamp (Campinas, Brasil). Después de la inscripción, los pacientes serán aleatorizados (n=20 por grupo) en una proporción de 1:1 para recibir 50 mg de diacereína o un tratamiento con placebo cada 12 horas durante 10 días.

Reclutamiento Se invitará a participar en el estudio a todos los pacientes ingresados ​​con COVID-19 que cumplan con los criterios de inclusión y exclusión. Después de leer y firmar el formulario de consentimiento informado, el paciente se asignará aleatoriamente a dos brazos de tratamiento.

Aleatorización y cegamiento Después de la inscripción, los pacientes serán aleatorizados (n=20 por grupo) 1:1 para recibir diacereína 50 mg o tratamiento con placebo cada 12 horas durante 10 días. Como sistema de aleatorización se utilizará la plataforma de captura electrónica de datos de investigación (REDCap). Los pacientes, investigadores y otro personal de apoyo no conocerán la terapia experimental. El fármaco del estudio, la diacereína (Artrodar®-cápsulas de 50 mg) y las cápsulas de placebo (lactosa y estearato de magnesio), serán similares en tamaño y apariencia para mantener el cegamiento. Todos los análisis de laboratorio se realizarán a ciegas del tratamiento. La identificación del fármaco del estudio solo se producirá después de bloquear el conjunto de datos.

Intervención de prueba Después de la aleatorización, los pacientes asignados al tratamiento activo recibirán 1 cápsula de diacereína (Artrodar®, 50 mg) por vía oral cada 12 horas durante 10 días. Los pacientes aleatorizados al grupo de placebo recibirán 1 cápsula (lactosa y estearato de magnesio) por vía oral cada 12 horas durante 10 días. Habrá un ajuste de la dosis del medicamento del estudio (diacereína o placebo) a 1 cápsula cada 24 horas (disminución de la diacereína a 50 mg cada 24 horas en lugar de cada 12 horas) en los participantes que experimenten una lesión renal aguda con una tasa de filtración glomerular estimada <30mL/min o que requiera terapia de reemplazo renal. Si se requiere terapia de reemplazo renal, el fármaco del estudio se administrará inmediatamente después de la diálisis.

Si el paciente está intubado, se abrirán las cápsulas de diacereína o placebo y se colocará su contenido en sobres de nylon previamente limpios y debidamente identificados. El contenido del sobre será disuelto en 10 a 20ml de agua destilada en jeringa de 20ml en el momento de la administración por enfermería en presencia de un investigador. La intervención del ensayo no retrasará ni afectará el manejo clínico del paciente de acuerdo con las políticas del centro local.

Análisis de laboratorio Al ingreso, se recolectará la primera muestra de sangre antes de la primera dosis del fármaco del estudio (Día 0), y luego tres y diez horas después de la administración del fármaco. También se recolectarán muestras de sangre el segundo (Día 2), el quinto (Día 5) y el décimo (Día 10) de tratamiento. A excepción de las muestras obtenidas al ingreso, las muestras de sangre se recogerán después de un ayuno de 12 horas. Inmediatamente después de la recolección, todas las muestras se centrifugarán a 3500 rpm y se congelarán en nitrógeno líquido para procesarlas en un solo lote. Citocinas inflamatorias (proteína c reactiva, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IFN-α2, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, IP-10 GM-CSF ) se medirá mediante inmunoensayo multiplex (Bio-Plex 200®, Bio-Rad), así como otros marcadores, como las mediciones de troponina-T y dímero D.

Criterios de valoración del estudio Los criterios de valoración son el cambio en los niveles séricos de citoquinas, troponina-T y dímero D del día 0 al día 5 de hospitalización, y del día 0 al día 10, así como el área bajo la curva considerando todas las mediciones desde Día 0 a Día 10.

Los criterios de valoración secundarios incluyen (i) tiempo hasta el deterioro clínico definido como el tiempo desde la aleatorización hasta la mortalidad o el empeoramiento de la escala de progresión clínica de la Organización Mundial de la Salud (OMS), evaluado por el aumento de dos puntos en esta escala; (ii) incidencia acumulada de eventos adversos; (iii) incidencia acumulada de eventos adversos graves.

Biodisponibilidad de la diacereína La biodisponibilidad de la diacereína y su metabolito activo, la reína, se evaluará en el suero de pacientes aleatorizados al tratamiento con diacereína para asegurar la biodisponibilidad en pacientes con COVID-19. Se utilizarán muestras del Día 0 y puntos temporales: poco antes, tres y diez horas después de la administración del fármaco del estudio. Se recolectarán estas muestras de todos los pacientes para mantener el enmascaramiento del estudio. Las concentraciones séricas de diacereína y reína se determinarán mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem al final del estudio.

Cálculo del tamaño de la muestra Como no hay datos disponibles sobre el efecto de la diacereína en la respuesta inflamatoria en pacientes con COVID-19, el tamaño de la muestra se estableció empíricamente en 40 sujetos con una expectativa conservadora de un tamaño del efecto estandarizado pequeño (0,2). Por ello, decidimos realizar una muestra piloto con 40 pacientes (n=20 por brazo del estudio) con resultados de respuesta inflamatoria sistémica y seguridad.

La población del análisis de seguridad se aplicó a todos los pacientes aleatorizados que recibieron al menos una dosis de diacereína. La evaluación de seguridad se basará en la incidencia acumulada de resultados de seguridad, eventos adversos, exámenes físicos, signos vitales y pruebas de laboratorio de seguridad. El criterio principal de valoración de seguridad será el tiempo entre la aleatorización y la primera aparición.

Análisis Estadístico Las variables continuas estarán representadas por la mediana y el rango intercuartílico asociado. Las variables categóricas se presentarán como frecuencia absoluta (n) y frecuencia relativa (%). El grupo de tratamiento proporcionará datos estadísticos resumidos (media, desviación estándar, mediana, mínimo y máximo) para las características demográficas y de referencia mediante una prueba de chi-cuadrado (p. ej., variables categóricas) y un modelo de análisis de varianza (ANOVA) de una vía. con el tratamiento como factor (p. ej., variables continuas). Además, las características demográficas y de referencia se compararán entre los grupos de tratamiento para la población por intención de tratar (ITT). La importancia de esta prueba se utilizará como una evaluación inicial para la satisfacción de la aleatorización.

Las concentraciones de citocinas proinflamatorias en plasma se considerarán criterios de valoración de la eficacia. Los grupos se compararán por los cambios en la admisión (Día 0) frente a los días de evaluación (Día 2, Día 5 y Día 10). Además, comparación entre las áreas bajo la curva para cada uno de los parámetros desde el día 0 hasta el día 10. Las variables continuas con distribución normal y no paramétrica serán comparadas por análisis de covarianza (ANCOVA) o por análisis de rango de varianza (RANKOVA) ajustado por valores de línea de base para mitigar la regresión hacia la media.