Studiedesign av Diacerein hos pasienter med Covid-19

Studiedesign Dette er en randomisert, placebokontrollert, dobbeltblindet pilotstudie designet for å verifisere om diacerein demper systemisk inflammatorisk respons hos innlagte pasienter med COVID-19. Denne studien er gjennomgått og godkjent av den etiske komiteen ved State University of Campinas (CAAE: 50440921.6.0000.5404).

Studiepopulasjon Førti pasienter med en bekreftet diagnose av COVID-19 vil bli registrert i studien. Pasientene vil bli identifisert som de innlagt på enten Hospital Estadual Sumaré (Sumaré, Brasil) og Unicamp Clinical Hospital (Campinas, Brasil). Etter registrering vil pasienter randomiseres (n=20 per gruppe) på en 1:1 måte for å motta enten diacerein 50 mg eller placebobehandling hver 12. time i 10 dager.

Rekruttering Alle pasienter innlagt med COVID-19 som oppfyller inklusjons- og eksklusjonskriteriene vil bli invitert til å delta i studien. Etter å ha lest og signert skjemaet for informert samtykke, vil pasienten bli tilfeldig fordelt på to behandlingsarmer.

Randomisering og blinding Etter registrering vil pasienter randomiseres (n=20 per gruppe) 1:1 for å motta enten diacerein 50 mg eller placebobehandling hver 12. time i 10 dager. Forskningsplattformen for elektronisk datafangst (REDCap) vil bli brukt som et randomiseringssystem. Pasienter, etterforskere og annet støttepersonell vil bli blindet for den eksperimentelle terapien. Studiemedikamentet, diacerein (Artrodar®-kapsler 50 mg) og placebokapsler (laktose og magnesiumstearat), vil være like i størrelse og utseende for å opprettholde blending. Alle laboratorieanalyser vil bli utført blindet for behandlingen. Identifikasjon av studiemedikamentet vil bare skje etter låsing av datasettet.

Forsøksintervensjon Etter randomisering vil pasienter som er allokert til den aktive behandlingen motta 1 kapsel diacerein (Artrodar®, 50 mg) oralt hver 12. time i 10 dager. Pasienter randomisert til placebogruppen vil få 1 kapsel (laktose og magnesiumstearat) oralt hver 12. time i 10 dager. Det vil være en dosejustering av studiemedisin (diacerein eller placebo) til 1 kapsel hver 24. time (redusert diacerein til 50 mg hver 24. time i stedet for hver 12. time) hos deltakere som opplever akutt nyreskade med en hastighet på estimert glomerulær filtrasjonshastighet <30 ml/min eller krever nyreerstatningsbehandling. Hvis nyreerstatningsterapi er nødvendig, vil studiemedisinen bli administrert umiddelbart etter dialyse.

Hvis pasienten intuberes, vil diacerein- eller placebokapslene åpnes og innholdet legges i tidligere rengjorte og riktig identifiserte nylonposer. Poseinnholdet vil bli oppløst i 10 til 20 ml destillert vann i en 20 ml sprøyte ved administrering av sykepleieren i nærvær av en forsker. Utprøvingsintervensjonen vil ikke forsinke eller påvirke pasientens kliniske ledelse i samsvar med retningslinjer for lokale senter.

Laboratorieanalyser Ved innleggelse vil den første blodprøven tas før første dose av studiemedikamentet (dag 0), og deretter tre og ti timer etter legemiddeladministreringen. Blodprøver vil også bli tatt på den andre (dag 2), femte (dag 5) og tiende (dag 10) behandlingsdag. Med unntak av prøver tatt ved innleggelse, vil blodprøver bli tatt etter 12 timers faste. Umiddelbart etter innsamling vil alle prøvene sentrifugeres ved 3500 rpm og fryses i flytende nitrogen for enkelt batch-behandling. Inflammatoriske cytokiner (c-reaktivt protein, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IFN-α2, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, IP-10 GM-CSF ) vil bli målt ved multipleks immunoassay (Bio-Plex 200®, Bio-Rad) samt andre markører som troponin-T og D-dimer målinger.

Studiens endepunkter Endepunktene er endringen i serumnivåene av cytokiner, troponin-T og D-dimer fra dag 0 til dag 5 av sykehusinnleggelsen, og fra dag 0 til dag 10, samt arealet under kurven tatt i betraktning alle målinger fra Dag 0 til dag 10.

Sekundære endepunkter inkluderer (i) tid til klinisk forverring definert som tid fra randomisering til dødelighet eller forverring av Verdens helseorganisasjons (WHO) kliniske progresjonsskala, vurdert ved en økning på to poeng i denne skalaen; (ii) kumulativ forekomst av uønskede hendelser; (iii) kumulativ forekomst av alvorlige uønskede hendelser.

Diacereins biotilgjengelighet Biotilgjengeligheten til diacerein og dets aktive metabolitt, rhein, vil bli evaluert i serumet til pasienter randomisert til diacereinbehandling for å sikre biotilgjengeligheten hos COVID-19-pasienter. Det vil bli brukt prøver fra dag 0 og tidspunkter: kort tid før, tre og ti timer etter administrasjonen av studiemedikamentet. Alle pasienter vil få disse prøvene samlet for å opprettholde blinding av studien. Serumdiacerein- og rheinkonsentrasjoner vil bli bestemt ved væskekromatografi-tandem massespektrometri ved slutten av studien.

Beregning av prøvestørrelse Siden det ikke er tilgjengelige data om effekten av diacerein på den inflammatoriske responsen hos pasienter med COVID-19, ble prøvestørrelsen empirisk fastslått ved 40 forsøkspersoner i en konservativ forventning om liten standardisert effektstørrelse (0,2). Derfor bestemte vi oss for å gjennomføre en pilotprøve med 40 pasienter (n=20 per arm av studien) med utfall fra systemisk inflammatorisk respons og sikkerhet.

Sikkerhetsanalysepopulasjonen ble brukt på alle randomiserte pasienter som fikk minst én dose diacerein. Sikkerhetsvurderingen vil være basert på den kumulative forekomsten av sikkerhetsutfall, uønskede hendelser, fysiske undersøkelser, vitale tegn og sikkerhetslaboratorietester. Det primære sikkerhetsendepunktet vil være tiden mellom randomisering og første forekomst.

Statistisk analyse Kontinuerlige variabler vil bli representert av medianen og det tilhørende interkvartilområdet. Kategoriske variabler vil bli presentert som absolutt frekvens (n) og relativ frekvens (%). Sammendrag av statistiske data (gjennomsnitt, standardavvik, median, minimum og maksimum) vil bli gitt av behandlingsgruppen for demografiske og baseline-karakteristikker ved bruk av en kjikvadrattest (f.eks. kategoriske variabler) og enveis variansanalyse (ANOVA) modell med behandling som faktor (f.eks. kontinuerlige variabler). I tillegg vil demografi og baseline-karakteristika bli sammenlignet på tvers av behandlingsgrupper for intention to treat-populasjonen (ITT). Betydningen av denne testen vil bli brukt som en innledende vurdering for tilfredsstillelse av randomisering.

Konsentrasjoner av plasma pro-inflammatoriske cytokiner vil bli vurdert som effektendepunkter. Gruppene vil bli sammenlignet med endringene i innleggelse (dag 0) kontra vurderingsdager (dag 2, dag 5 og dag 10). Også sammenligning mellom arealene under kurven for hver av parameterne fra dag 0 til dag 10. Kontinuerlige variabler med normal og ikke-parametrisk fordeling vil bli sammenlignet ved analyse av kovarians (ANCOVA) eller ved analyse av variansrangering (RANKOVA) justert med basislinjeverdier for å dempe regresjonen mot gjennomsnittet.