Vliv kyseliny alfa-lipoové na regresi skvamózních intraepiteliálních lézí nízkého stupně (LSIL)

Cervikální intraepiteliální neoplazie (CIN) je premaligní změna na děložním čípku, která může vést k maligním změnám, tj. rakovině děložního čípku. Dnes je tento termín nahrazen novějším termínem skvamózní intraepiteliální léze (SIL). Se zavedením termínu SIL (jak navrhuje systém Bethesda) se pro klasifikaci premaligních změn děložního čípku používají dva stupně: SIL nízkého stupně (LSIL), který zahrnuje kondylomy a mírnou dysplazii (CIN I), a vysoký stupeň stupně skvamózní intraepiteliální léze (HSIL), která zahrnuje změny ve smyslu dysplazie středního a vysokého stupně (CIN II a CIN III). Hlavním etiologickým faktorem, který vede ke vzniku cervikální neoplazie, je lidský papilloma virus (HPV). Na progresi onemocnění hrají roli i další etiologické faktory jako kouření, perorální antikoncepce, sexuální návyky, chemikálie, imunosupresivní léčba, imunodeficitní onemocnění, socioekonomické životní podmínky a nutriční stav pacientů. Kromě výše uvedeného jsou důležitými etiologickými faktory při vzniku SIL také zánět a oxidační stres. Maligní změny na děložním čípku se totiž neobjevují na zcela zdravém děložním čípku, ale jsou vždy spojeny s chronickou cervicitidou.

Kyselina alfa-lipoová (ALA) je neesenciální mastná kyselina s četnými metabolickými úlohami a její terapeutický potenciál je zkoumán u mnoha patofyziologických stavů. Kromě toho, že ALA působí jako kofaktor četných signálních drah v buňce, má také standardní redoxní potenciál -0,32 V, což jí dává schopnost regenerovat nejdůležitější fyziologické antioxidanty in vivo (např. vitamin C a E) a činí z něj jeden z nejúčinnějších přírodních antioxidantů. Vzhledem k tomu, že je implikován jako modulátor různých zánětlivých signálních drah, byly jeho protizánětlivé vlastnosti zkoumány velkým počtem klinických studií. T Tato působivá řada buněčných a molekulárních funkcí vedla k významnému zájmu o výzkum a použití ALA jako doplňku stravy. ALA prokazatelně zlepšuje inzulínovou rezistenci, zmírňuje příznaky diabetické neuropatie, kombinuje se s fototerapií při léčbě vitiliga, zlepšuje hojení ran a zvyšuje účinnost redukčních diet. Jeho použití jako doplňku stravy je v současnosti zkoumáno u demence, syndromu pálení v ústech, karpálního syndromu, glaukomu, šedého zákalu, hypertenze a onemocnění periferních tepen. Pro terapeutické účely se ALA podává orálně v dávkách 300-1800 mg/den a pro některé indikace bylo zkoumáno její topické a parenterální podávání. Bezpečnost perorálního podávání v uvedených dávkách byla zkoumána v mnoha klinických studiích trvajících od 4 měsíců do 4 let. Účinnost ALA u premaligních změn děložního čípku nebyla dosud zkoumána. Vzhledem k prokázané účinnosti perorální suplementace jinými antioxidanty (jako jsou polyfenoly ze zeleného čaje nebo Se) u pacientů s LSIL je cílem tohoto výzkumu poprvé prozkoumat účinnost ALA v regresi LSIL.

Studie byla navržena jako dvojitě zaslepená, randomizovaná, placebem kontrolovaná studie, kde byli účastníci požádáni, aby si sami aplikovali buď 600 mg ALA ve formě 2 kapslí obsahujících 300 mg ALA (darováno společností Zada ​​Pharmaceuticals, Lukavac, Bosna a Hercegovina). nebo placebo (poskytované jako identické perorální kapsle obsahující rýžový škrob, také darované společností Zada ​​Pharmaceuticals) per os denně po dobu 3 měsíců. Výzkumný protokol pro tuto studii byl schválen Etickou komisí Univerzity v Záhřebu, Fakulty farmacie a biochemie a Etickou komisí Univerzitního klinického centra Tuzla. Studie byla provedena v souladu s mezinárodními, národními a institucionálními směrnicemi týkajícími se klinických studií a práv na biodiverzitu a byla v souladu s pokyny CONSORT.

Při úvodní schůzce byli způsobilí pacienti seznámeni s designem studie. Byli informováni o protokolu studie: cíl a účel studie, obecná metodika, očekávané role účastníků, potenciální rizika účasti ve studii, potenciální přínosy účasti ve studii, otázky důvěrnosti dat a kontaktní údaje vyšetřovatelé, kteří v případě potřeby poskytli jakékoli další potřebné informace. V případě, že pacient souhlasil s účastí ve studii, podepsal jsem informovaný souhlas. Všichni účastníci byli požádáni, aby dali svůj písemný informovaný souhlas se zařazením do studie. Po zařazení do studie pacienti vyplnili vstupní dotazník a poskytli informace o základních antropometrických charakteristikách, reprodukční anamnéze, současné medikaci a hlavních charakteristikách životního stylu (kouření, úroveň fyzické aktivity). Vyšetření stravovacích a životních návyků pacientů bylo prováděno pomocí standardizovaného a validovaného semikvantitativního dotazníku frekvence jídla (FFQ) za pomoci vyškoleného personálu. Pacientům bylo doporučeno, aby během studie neměnili stravu.

Účastníci byli randomizováni v poměru 1:1 pro ALA: placebo. Pacientům bylo náhodně přiděleno číslo pacienta, které určovalo jejich přidělení suplementů. Dostali dvě lahvičky kapslí předem označených číslem studie obsahující buď kapsle ALA dostatečné na 3 měsíce suplementace, nebo identické kapsle placeba (rýžový škrob) dostatečné na 3 měsíce suplementace. Pacienti byli požádáni, aby po 3 měsících vrátili zbývající tobolky, aby bylo možné posoudit dodržování. Během období suplementace byli účastníci dvakrát telefonicky kontaktováni členem výzkumného týmu, aby ověřili možné nežádoucí účinky a zlepšili adherenci. Shoda po registraci byla měřena jako procento pilulek užívaných mezi návštěvami. Jedinci, kteří po randomizaci užívali méně než 75 % pilulek, byli považováni za nevyhovující a byli ze studie vyřazeni. 3 měsíce po vstupu byli účastníci pozváni na následnou schůzku.

Při vstupním i následném vyšetření byl proveden cytologický screening, kolposkopie a cílená biopsie a histologické potvrzení cytologicko-kolposkopické diagnózy a odebrány a analyzovány krevní vzorky (zhodnocení primárních a sekundárních výsledků studie). Vzorky byly odebírány na Gynekologicko-porodnické klinice Univerzitního klinického centra Tuzla po dobu 18 měsíců. Analýzy vzorků byly provedeny v Univerzitním klinickém centru Tuzla a Univerzitě v Záhřebu, Fakultě farmacie a biochemie. Statistické zpracování, analýza a interpretace výsledků studie byla dokončena do 6 měsíců od ukončení analýzy biologických vzorků.

Osobní údaje pacientů, údaje o jejich životním stylu a stravovacích návycích (získané z FFQ) a měření primárních a sekundárních výsledků studie byly uloženy a zpracovány v elektronické podobě registru pacientů. Byl vyvinut datový slovník obsahující podrobné popisy každé proměnné používané registrem, včetně zdroje proměnné. Registr byl provozován podle standardních operačních postupů Univerzitního klinického centra Tuzla. Projektový manažer a jeho spolupracovníci byli povinni plně dodržovat předepsané postupy ochrany osobních údajů. Údaje o pacientech byly zadávány do projektových databází podle počátečních písmen jména a příjmení pacientů a pomocí speciálního kódu. Jejich zdravotní dokumentaci kontroloval pouze projektový manažer a jeho spolupracovníci a jméno pacientů nebylo nikdy prozrazeno třetím stranám. Dokumentace pacientů byla přístupná zástupcům Etické komise na pracovišti, kde probíhala klinická studie (Univerzitní klinické centrum Tuzla) a zástupcům Výboru pro etiku experimentální práce Farmaceutické a biochemické fakulty Univerzity v Záhřebu, která odpovídá za schvalování a dohled nad prováděním tohoto výzkumu.

Pro zajištění rovnováhy byla provedena bloková randomizace pacientů pomocí interního počítačového programu. Ke stanovení velikosti vzorku byl použit vzorec pro velikost vzorku randomizované klinické studie, kde chyba typu jedna (α) byla nastavena na 5 % a síla studie byla nastavena na 90 %. Poměr případů ke kontrole byl 1 a očekávané vyřazení bylo 2 %. LSIL byl hlavním výsledkem studie; očekávaný podíl LSIL v kontrolní skupině byl 50 % a v léčené skupině 40 %. Za předpokladu 2% vyřazení byla cílová velikost vzorku stanovena na 96 (48 subjektů na skupinu). Výsledky výzkumu (kvalifikace lézí cervikálního dlaždicového epitelu, parametry zánětu, parametry oxidačního stresu) byly statisticky zpracovány pomocí softwarového balíku MedCalc. Základní vlastnosti proměnných byly testovány pomocí deskriptivní analýzy. Normalita distribuce dat byla testována pomocí Kolmogorova-Smirnovova testu a pro další analýzu výsledků byly použity parametrické nebo neparametrické statistické testy.