Effect van alfa-liponzuur op regressie van laaggradige squameuze intra-epitheliale laesies (LSIL)

Cervicale intra-epitheliale neoplasie (CIN) is een premaligne verandering van de baarmoederhals die kan leiden tot kwaadaardige veranderingen, d.w.z. baarmoederhalskanker. Tegenwoordig is deze term vervangen door de meer recente term squameuze intra-epitheliale laesie (SIL). Met de introductie van de term SIL in gebruik (zoals voorgesteld door het Bethesda-systeem), worden twee graden gebruikt om premaligne veranderingen van de cervix te classificeren: SIL van lage graad (LSIL) die condylomen en milde dysplasie (CIN I) omvat, en hoog- graad squameuze intra-epitheliale laesie (HSIL) die veranderingen omvat in termen van medium en hoogwaardige dysplasie (CIN II en CIN III). De belangrijkste etiologische factor die leidt tot de vorming van cervicale neoplasie is het humaan papillomavirus (HPV). Andere etiologische factoren zoals roken, anticonceptiva voor orale therapie, seksuele gewoonten, chemicaliën, immunosuppressieve therapie, immunodeficiëntieziekten, sociaaleconomische levensomstandigheden en voedingsstatus van patiënten spelen ook een rol bij de progressie van de ziekte. Naast het bovenstaande zijn ontsteking en oxidatieve stress ook belangrijke etiologische factoren bij de ontwikkeling van SIL. Kwaadaardige veranderingen aan de baarmoederhals verschijnen namelijk niet op een volledig gezonde baarmoederhals, maar worden altijd geassocieerd met chronische cervicitis.

Alfa-liponzuur (ALA) is een niet-essentieel vetzuur met tal van metabole rollen en het therapeutisch potentieel ervan wordt onderzocht bij veel pathofysiologische aandoeningen. ALA werkt niet alleen als een cofactor van talloze signaalroutes in de cel, maar heeft ook een standaard redoxpotentiaal van -0,32 V, waardoor het de belangrijkste fysiologische antioxidanten in vivo kan regenereren (bijv. vitamine C en E) en maakt het een van de krachtigste natuurlijke antioxidanten. Aangezien het betrokken is als een modulator van verschillende inflammatoire signaleringsroutes, zijn de ontstekingsremmende eigenschappen ervan onderzocht door een groot aantal klinische onderzoeken. T Deze indrukwekkende reeks cellulaire en moleculaire functies heeft geleid tot grote belangstelling voor het onderzoek naar en het gebruik van ALA als voedingssupplement. Het is bewezen dat ALA de insulineresistentie verbetert, symptomen van diabetische neuropathie verlicht, gecombineerd wordt met fototherapie bij de behandeling van vitiligo, wondgenezing verbetert en de effectiviteit van reductiediëten verhoogt. Het gebruik ervan als voedingssupplement wordt momenteel onderzocht bij dementie, brandende mondsyndroom, carpaal syndroom, glaucoom, staar, hypertensie en perifere arteriële ziekte. Voor therapeutische doeleinden wordt ALA oraal toegediend in doses van 300-1800 mg/dag, en voor sommige indicaties is de topische en parenterale toediening ervan onderzocht. De veiligheid van orale toediening in de genoemde doseringen is onderzocht in vele klinische onderzoeken die 4 maanden tot 4 jaar duurden. De effectiviteit van ALA bij premaligne veranderingen van de baarmoederhals is tot op heden niet onderzocht. Gezien de bewezen effectiviteit van orale suppletie met andere antioxidanten (zoals polyfenolen uit groene thee of Se) bij patiënten met LSIL, is het doel van dit onderzoek om voor het eerst de effectiviteit van ALA bij regressie van LSIL te onderzoeken.

De studie was opgezet als een dubbelblinde, gerandomiseerde, placebogecontroleerde studie waarbij de deelnemers werd gevraagd om ofwel 600 mg ALA zelf toe te dienen in de vorm van 2 capsules met 300 mg ALA (gedoneerd door Zada ​​Pharmaceuticals, Lukavac, Bosnië en Herzegovina) of een placebo (geleverd als identieke orale capsules met rijstzetmeel, ook gedoneerd door Zada ​​Pharmaceuticals) per os dagelijks gedurende 3 maanden. Het onderzoeksprotocol voor deze studie is goedgekeurd door de Ethische Commissie van de Universiteit van Zagreb, Faculteit Farmacie en Biochemie en de Ethische Commissie van het Universitair Klinisch Centrum Tuzla. De proef werd uitgevoerd in overeenstemming met de internationale, nationale en institutionele richtlijnen met betrekking tot klinische studies en biodiversiteitsrechten en voldeed aan de CONSORT-richtlijnen.

Bij de eerste afspraak maakten in aanmerking komende patiënten kennis met de onderzoeksopzet. Ze werden geïnformeerd over het onderzoeksprotocol: doel en doel van het onderzoek, algemene methodologie, verwachte rollen van de deelnemers, mogelijke risico's van deelname aan het onderzoek, mogelijke voordelen van deelname aan het onderzoek, problemen met de vertrouwelijkheid van gegevens en contactgegevens van rechercheurs die, indien nodig, elke vorm van extra benodigde informatie verstrekten. Als de patiënt ermee instemde deel te nemen aan het onderzoek, ondertekende hij het formulier voor geïnformeerde toestemming. Alle deelnemers werd gevraagd om hun schriftelijke geïnformeerde toestemming te geven voor opname in het onderzoek. Na opname in het onderzoek vulden de patiënten een basisvragenlijst in en verstrekten informatie over basale antropometrische kenmerken, reproductieve geschiedenis, huidige medicatie en belangrijke levensstijlkenmerken (roken, mate van fysieke activiteit). Onderzoek van de eet- en leefgewoonten van patiënten werd uitgevoerd met behulp van een gestandaardiseerde en gevalideerde semikwantitatieve voedselfrequentievragenlijst (FFQ) met de hulp van getraind personeel. Patiënten werd geadviseerd hun dieet tijdens het onderzoek niet te veranderen.

Deelnemers werden gerandomiseerd in de verhouding 1:1 voor ALA:placebo. Patiënten kregen willekeurig een patiëntnummer toegewezen dat hun supplementtoewijzing bepaalde. Ze ontvingen twee flesjes met capsules, vooraf gelabeld met hun studienummer, die ofwel ALA-capsules bevatten die voldoende zijn voor 3 maanden suppletie, of identieke capsules placebo (rijstzetmeel) die voldoende zijn voor 3 maanden suppletie. Patiënten werd gevraagd om de resterende capsules na de periode van 3 maanden terug te sturen om de therapietrouw te beoordelen. Tijdens de suppletieperiode werden de deelnemers tweemaal telefonisch gecontacteerd door een lid van het onderzoeksteam om mogelijke nadelige effecten te controleren en de therapietrouw te verbeteren. Naleving na inschrijving werd gemeten als het percentage pillen dat tussen bezoeken werd ingenomen. Proefpersonen die na randomisatie minder dan 75% van de pillen slikten, werden beschouwd als niet-conform en werden uit het onderzoek gehaald. 3 maanden na binnenkomst werden de deelnemers uitgenodigd voor een vervolgafspraak.

Bij zowel de eerste als de vervolgafspraak werden cytologische screening, colposcopie en gerichte biopsie en histologische bevestiging van de cytologisch-colposcopische diagnose uitgevoerd en werden bloedmonsters genomen en geanalyseerd (beoordeling van primaire en secundaire uitkomsten van de studie). De monsters werden gedurende een periode van 18 maanden verzameld in de Gynaecologie- en Verloskundekliniek van het Universitair Klinisch Centrum Tuzla. Er werden monsteranalyses uitgevoerd in het Universitair Klinisch Centrum Tuzla en de Universiteit van Zagreb, Faculteit Farmacie en Biochemie. Statistische verwerking, analyse en interpretatie van de onderzoeksresultaten werd binnen 6 maanden na het einde van de analyse van de biologische monsters voltooid.

Persoonlijke gegevens van patiënten, gegevens over hun levensstijl en eetgewoonten (verkregen uit de FFQ) en metingen van de primaire en secundaire uitkomsten van de studie werden opgeslagen en verwerkt in elektronische vorm van het patiëntenregister. Er is een gegevenswoordenboek ontwikkeld met gedetailleerde beschrijvingen van elke variabele die door het register wordt gebruikt, inclusief de bron van de variabele. Het register werd beheerd volgens de standaard operatieprocedures van het Universitair Klinisch Centrum Tuzla. Projectmanager en zijn medewerkers waren verplicht de voorgeschreven procedures voor de bescherming van persoonsgegevens volledig na te leven. Patiëntgegevens werden ingevoerd in projectdatabases volgens de initialen van de voor- en achternaam van de patiënt en met behulp van een speciale code. Hun medische documentatie werd alleen beoordeeld door de projectmanager en zijn medewerkers, en de naam van de patiënt werd nooit aan derden bekendgemaakt. Patiëntendocumentatie was toegankelijk voor vertegenwoordigers van de ethische commissie van de instelling waar de klinische studie werd uitgevoerd (Universitair Klinisch Centrum Tuzla) en vertegenwoordigers van de commissie voor de ethiek van experimenteel werk van de faculteit Farmacie en Biochemie van de Universiteit van Zagreb, die is verantwoordelijk voor het goedkeuren van en toezicht houden op de uitvoering van dit onderzoek.

Blokrandomisatie van patiënten werd uitgevoerd om de balans te waarborgen met behulp van een intern computerprogramma. Om de steekproefomvang te bepalen, werd een gerandomiseerde formule voor de steekproefomvang van een klinische proef gebruikt, waarbij type één (α)-fout werd vastgesteld op 5% en het studievermogen werd vastgesteld op 90%. De verhouding tussen patiënt en controle was 1 en de verwachte uitval was 2%. LSIL was het belangrijkste resultaat van de studie; het verwachte aandeel van LSIL in de controlegroep was 50% en in de behandelde groep 40%. Uitgaande van een uitval van 2% is de beoogde steekproefomvang vastgesteld op 96 (48 proefpersonen per groep). De onderzoeksresultaten (kwalificatie van cervicale plaveiselepitheellaesies, ontstekingsparameters, parameters oxidatieve stress) werden statistisch verwerkt met behulp van het softwarepakket MedCalc. De basiskenmerken van de variabelen werden getest met behulp van beschrijvende analyse. De normaliteit van de gegevensverdeling werd getest met behulp van de Kolmogorov-Smirnov-test en parametrische of niet-parametrische statistische tests werden gebruikt voor verdere analyse van de resultaten.