Wpływ kwasu alfa-liponowego na regresję śródnabłonkowych zmian płaskonabłonkowych niskiego stopnia (LSIL)

Śródnabłonkowa neoplazja szyjki macicy (CIN) to przednowotworowa zmiana szyjki macicy, która może prowadzić do zmian złośliwych, np. raka szyjki macicy. Obecnie termin ten został zastąpiony nowszym terminem płaskonabłonkowa zmiana śródnabłonkowa (SIL). Wraz z wprowadzeniem do użytku terminu SIL (zgodnie z propozycją systemu Bethesda) do klasyfikacji zmian przednowotworowych szyjki macicy stosuje się dwa stopnie: SIL niskiego stopnia (LSIL), który obejmuje kłykciny i łagodną dysplazję (CIN I), oraz wysoki stopień płaskonabłonkowej zmiany śródnabłonkowej (HSIL), która obejmuje zmiany w zakresie dysplazji średniego i dużego stopnia (CIN II i CIN III). Głównym czynnikiem etiologicznym prowadzącym do powstawania nowotworów szyjki macicy jest wirus brodawczaka ludzkiego (HPV). Inne czynniki etiologiczne, takie jak palenie tytoniu, doustne środki antykoncepcyjne, nawyki seksualne, chemikalia, terapia immunosupresyjna, niedobory odporności, socjoekonomiczne warunki życia i stan odżywienia pacjentów również odgrywają rolę w progresji choroby. Oprócz powyższego, zapalenie i stres oksydacyjny są również ważnymi czynnikami etiologicznymi w rozwoju SIL. Mianowicie zmiany złośliwe na szyjce macicy nie pojawiają się na całkowicie zdrowej szyjce macicy, ale zawsze są związane z przewlekłym zapaleniem szyjki macicy.

Kwas alfa-liponowy (ALA) jest nieistotnym kwasem tłuszczowym o wielu rolach metabolicznych, a jego potencjał terapeutyczny jest badany w wielu stanach patofizjologicznych. Oprócz działania jako kofaktor wielu szlaków sygnałowych w komórce, ALA posiada również standardowy potencjał redoks -0,32 V, co daje mu zdolność do regeneracji najważniejszych fizjologicznych przeciwutleniaczy in vivo (m.in. witaminę C i E) i czyni ją jednym z najsilniejszych naturalnych przeciwutleniaczy. Biorąc pod uwagę, że jest zaangażowany jako modulator różnych zapalnych szlaków sygnałowych, jego właściwości przeciwzapalne zostały zbadane w wielu badaniach klinicznych. T Ten imponujący zestaw funkcji komórkowych i molekularnych doprowadził do znacznego zainteresowania badaniami i wykorzystaniem ALA jako suplementu diety. Udowodniono, że ALA poprawia insulinooporność, łagodzi objawy neuropatii cukrzycowej, łączy się z fototerapią w leczeniu bielactwa, poprawia gojenie się ran i zwiększa skuteczność diet redukcyjnych. Jego zastosowanie jako suplementu diety jest obecnie badane w demencji, zespole piekących ust, zespole nadgarstka, jaskrze, zaćmie, nadciśnieniu i chorobie tętnic obwodowych. W celach terapeutycznych ALA podaje się doustnie w dawkach 300-1800 mg/dobę, a dla niektórych wskazań badano jego podawanie miejscowe i pozajelitowe. Bezpieczeństwo podawania doustnego w wymienionych dawkach zostało zbadane w wielu badaniach klinicznych trwających od 4 miesięcy do 4 lat. Skuteczność ALA w zmianach przednowotworowych szyjki macicy nie była dotychczas badana. Biorąc pod uwagę udowodnioną skuteczność doustnej suplementacji innymi przeciwutleniaczami (takimi jak polifenole z zielonej herbaty lub Se) u pacjentów z LSIL, celem tych badań jest zbadanie po raz pierwszy skuteczności ALA w regresji LSIL.

Badanie zostało zaprojektowane jako podwójnie ślepe, randomizowane, kontrolowane placebo badanie, w którym uczestnicy zostali poproszeni o samodzielne podanie 600 mg ALA w postaci 2 kapsułek zawierających 300 mg ALA (podarowane przez Zada ​​Pharmaceuticals, Lukavac, Bośnia i Hercegowina) lub placebo (dostarczane w postaci identycznych kapsułek doustnych zawierających skrobię ryżową, również przekazanych przez Zada ​​Pharmaceuticals) doustnie codziennie przez 3 miesiące. Protokół badawczy dla tego badania został zatwierdzony przez Komisję Etyki Uniwersytetu w Zagrzebiu, Wydziału Farmaceutycznego i Biochemii oraz Komisję Etyki Uniwersyteckiego Centrum Klinicznego Tuzla. Badanie zostało przeprowadzone zgodnie z międzynarodowymi, krajowymi i instytucjonalnymi wytycznymi dotyczącymi badań klinicznych i praw do różnorodności biologicznej oraz było zgodne z wytycznymi CONSORT.

Podczas pierwszej wizyty kwalifikujący się pacjenci zostali zapoznani z projektem badania. Zostali oni poinformowani o protokole badania: celu i celu badania, ogólnej metodologii, przewidywanych rolach uczestników, potencjalnych zagrożeniach związanych z udziałem w badaniu, potencjalnych korzyściach z udziału w badaniu, kwestiach poufności danych oraz danych kontaktowych śledczych, którzy w razie potrzeby dostarczali wszelkiego rodzaju dodatkowych potrzebnych informacji. W przypadku, gdy pacjent wyrażał zgodę na udział w badaniu, podpisywał formularz świadomej zgody. Wszyscy uczestnicy zostali poproszeni o wyrażenie świadomej pisemnej zgody na włączenie do badania. Po włączeniu do badania pacjenci wypełnili wyjściowy kwestionariusz i podali informacje na temat podstawowych cech antropometrycznych, wywiadu rozrodczego, aktualnie przyjmowanych leków oraz głównych cech stylu życia (palenie tytoniu, poziom aktywności fizycznej). Z pomocą przeszkolonego personelu przeprowadzono badanie nawyków żywieniowych i życiowych pacjentów za pomocą wystandaryzowanego i zatwierdzonego półilościowego kwestionariusza częstotliwości spożywania posiłków (FFQ). Pacjentom zalecono, aby nie zmieniali diety w trakcie badania.

Uczestnicy zostali losowo przydzieleni w stosunku 1:1 dla ALA: placebo. Pacjentom losowo przydzielono numer pacjenta, który określał ich przydział suplementu. Otrzymali dwie butelki kapsułek z etykietą z numerem ich badania, zawierające albo kapsułki ALA wystarczające na 3 miesiące suplementacji, albo identyczne kapsułki placebo (skrobia ryżowa) wystarczające na 3 miesiące suplementacji. Pacjentów poproszono o zwrot pozostałych kapsułek po 3-miesięcznym okresie w celu oceny przestrzegania zaleceń. W okresie suplementacji uczestnicy dwukrotnie kontaktowali się telefonicznie z członkiem zespołu badawczego w celu sprawdzenia ewentualnych skutków ubocznych i poprawy przestrzegania zaleceń. Zgodność po rejestracji mierzono jako odsetek tabletek przyjmowanych między wizytami. Pacjenci, którzy przyjęli mniej niż 75% tabletek po randomizacji, zostali uznani za nieprzestrzegających zaleceń i zostali wykluczeni z badania. 3 miesiące po wejściu uczestnicy zostali zaproszeni na spotkanie kontrolne.

Zarówno na wizycie wstępnej, jak i kontrolnej wykonano przesiewowe badanie cytologiczne, kolposkopię i biopsję celowaną oraz histologiczne potwierdzenie rozpoznania cytologiczno-kolposkopowego oraz pobrano i poddano analizie próbki krwi (ocena pierwszorzędowych i drugorzędowych wyników badania). Próbki pobierano w Klinice Ginekologii i Położnictwa Uniwersyteckiego Centrum Klinicznego Tuzla przez okres 18 miesięcy. Analizy próbek przeprowadzono w Uniwersyteckim Centrum Klinicznym w Tuzli oraz na Wydziale Farmacji i Biochemii Uniwersytetu w Zagrzebiu. Obróbka statystyczna, analiza i interpretacja wyników badań została zakończona w ciągu 6 miesięcy od zakończenia analizy próbek biologicznych.

Dane osobowe pacjentów, dane dotyczące ich stylu życia i nawyków żywieniowych (uzyskane z FFQ) oraz pomiary pierwszorzędowych i drugorzędowych wyników badania były gromadzone i przetwarzane w postaci elektronicznej rejestru pacjentów. Opracowano słownik danych zawierający szczegółowe opisy każdej zmiennej wykorzystywanej przez rejestr, w tym źródło zmiennej. Rejestr prowadzony był zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi Uniwersyteckiego Centrum Klinicznego Tuzla. Kierownik projektu i jego współpracownicy zostali zobowiązani do pełnego przestrzegania przewidzianych procedur ochrony danych osobowych. Dane pacjentów wprowadzano do baz projektu według inicjałów imion i nazwisk pacjentów oraz przy użyciu specjalnego kodu. Ich dokumentacja medyczna była przeglądana jedynie przez kierownika projektu i jego współpracowników, a nazwiska pacjentów nigdy nie były ujawniane osobom trzecim. Dokumentacja pacjentów była dostępna dla przedstawicieli Komisji Etyki w ośrodku, w którym prowadzono badanie kliniczne (Uniwersyteckie Centrum Kliniczne Tuzla) oraz przedstawicieli Komisji ds. Etyki Pracy Doświadczalnej Wydziału Farmaceutycznego i Biochemii Uniwersytetu w Zagrzebiu, która odpowiada za zatwierdzanie i nadzór nad przebiegiem tych badań.

Przeprowadzono randomizację blokową pacjentów w celu zapewnienia równowagi przy użyciu wewnętrznego programu komputerowego. Aby określić wielkość próby, zastosowano wzór wielkości próby z randomizacją, w którym błąd pierwszego rodzaju (α) ustalono na 5%, a moc badania na 90%. Stosunek przypadków do kontroli wynosił 1, a oczekiwany spadek wynosił 2%. LSIL był głównym wynikiem badania; oczekiwany odsetek LSIL w grupie kontrolnej wynosił 50%, aw grupie leczonej 40%. Przy założeniu 2% odpadu docelowa wielkość próby została ustalona na 96 (48 osób na grupę). Wyniki badań (kwalifikacja zmian nabłonka płaskonabłonkowego szyjki macicy, parametry stanu zapalnego, parametry stresu oksydacyjnego) opracowano statystycznie za pomocą programu MedCalc. Podstawowe cechy zmiennych przetestowano za pomocą analizy opisowej. Normalność rozkładu danych badano za pomocą testu Kołmogorowa-Smirnowa, a do dalszej analizy wyników zastosowano parametryczne lub nieparametryczne testy statystyczne.