Hodnocení virové replikace pomocí tonate viru (TONV) a viru Zika (ZIKV), v rámci ex vivo trofoblastu a placentárního modelu (ZITOPEx)
Přehled studie
Postavení
Podmínky
Detailní popis
Analýza se bude vztahovat pro každý studovaný virus + kontrola + favipiravir na 1 placentu v 1. trimestru a 1 placentu v termínu.
Budou naplánovány 2 experimenty na virus.
Typ studie
Kontakty a umístění
Kritéria účasti
Kritéria způsobilosti
Věk způsobilý ke studiu
Přijímá zdravé dobrovolníky
Metoda odběru vzorků
Studijní populace
Popis
Kritéria pro zařazení:
- Pacient starší 18 let
- Jednočetné těhotenství normálního průběhu, v termínu, porod císařským řezem NEBO
- Trofoblast z dobrovolného ukončení těhotenství (IVG), po endo-uterinní aspiraci
Kritéria vyloučení:
- Nutnost patologického, genetického nebo bakteriologického vyšetření placenty
- Vícečetné těhotenství
- HBV+ (pozitivní hepatitida B), HCV+ (pozitivní hepatitida C), známá sérokonverze CMV během těhotenství (CytoMégalovirus)
- Imunosuprese (léky, kortikosteroidy atd.)
- Diabetes
- Preeklampsie
- intrauterinní růstová retardace (IUGR),
- Cévní nebo placentární patologie.
- Odmítnutí účasti
- Pacient v opatrovnictví / kurátorství / bezpečnostní opatření
- Pacient pod AME (státní lékařská pomoc)
Studijní plán
Jak je studie koncipována?
Detaily designu
Kohorty a intervence
Skupina / kohorta |
Intervence / Léčba |
|---|---|
|
Lidské placenty a trofoblasty (biologický odpad) z nekomplikovaných těhotenství.
Placenty budou odebrány po porodu císařským řezem po ústní a písemné informaci doručením informační zprávy ženám, které měly normální jednočetné těhotenství v termínu. Podobně se trofoblasty odebírají po endo-uterinní aspiraci v souvislosti s dobrovolným ukončením těhotenství.
|
Buňky C6/36 budou kultivovány v kultivačním médiu L15 (Leibovitzovo médium L-15), doplněném 5 % FBS (fetální bovinní sérum) a 1 % penicilin/streptomycin při 28 °C ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % C02.
ZIKV a TONV budou expandovány a titrovány pomocí buněk C6/36.
Zásoba viru bude rozdělena na alikvoty po 100 ul alikvotech a skladována při -80 °C.
Placentární tkáně budou zpracovány do jedné hodiny po porodu. Choriové klky budou rozřezány na 5mm řezy a tkáně budou hojně promyty, minimálně 3x standardním kultivačním médiem (RPMI-1640 doplněné 10% tepelně inaktivovaným fetálním telecím sérem (FCS), 1% L-glutaminem a 1% penicilinem /Streptomycin) k odstranění mateřské krve, membrán a krevních sraženin. Kolagenové gelové houby budou umístěny do jamek 6-jamkové destičky obsahující 3 ml kultivačního média (RPMI-1640 doplněné 15 % tepelně inaktivovaným fetálním bovinním sérem (FCS), 1 % penicilin/streptomycin, 0,1 % gentamycin, 1 % amfotericin B 1% L-Glutamin, 1% neesenciální aminokyselina, 1% pyruvát sodný) na jamku. Choriové klky budou rozřezány na 5mm řezy a umístěny na vršek kolagenových gelových houbiček na rozhraní mezi kultivačním médiem a vzduchem. Tkáně budou lyzovány mechanickým rozrušením v lyzačním pufru + 4% TCEP (Tris(2-karboxyethyl)fosfin hydrochlorid) (Machery-Nagel ref: 740395.107) se systémem Precellys. Lyzované tkáně budou zředěny ve 100 mg/ml lyzačního pufru Macherey-Nagel, rozděleny na alikvoty a skladovány při -80 °C až do extrakce. Celková RNA bude extrahována v duplikátech za použití sady Nucleospin 96 RNA Core (Macherey Nagel ref: 740466.4), podle pokynů dodavatele. Standardní vzorky, kontroly a virová RNA ZIKV a TONV budou extrahovány a testovány paralelně za stejných podmínek. Extrahovaná RNA bude podrobena reverzní transkriptáze za použití soupravy Superscript One-Step RT-qPCR (Invitrogen ref: 11732088) podle doporučení výrobce, se sondou a primerem specifickými pro ZIKV a TONV. |
Co je měření studie?
Primární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Posoudit replikační potenciál TONV a ZIKV po infekci placenty ex vivo.
Časové okno: zařazení
|
Stanovte virovou zátěž (RT-qtPCR) TONV a ZIKV po infekci placenty, ex vivo v RNA kopiích/ml
|
zařazení
|
Sekundární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Ověřte ex vivo placentární model pro TONV.
Časové okno: Zařazení
|
Analýza virové zátěže v placentárních explantátech na TONV v RNA kopiích/ml
|
Zařazení
|
|
Porovnejte virovou infekci placenty v různých obdobích těhotenství (první trimestr a termín).
Časové okno: první trimestr
|
Analýza virové zátěže podle termínu v RNA kopiích/ml
|
první trimestr
|
|
Porovnejte virovou infekci placenty v různých obdobích těhotenství (první trimestr a termín).
Časové okno: první trimestr
|
Analýza genové exprese různých cytokinů podle termínu v RNA kopiích/ml
|
první trimestr
|
|
Porovnejte virovou infekci placenty v různých obdobích těhotenství (první trimestr a termín).
Časové okno: první trimestr
|
Analýza histologických lézí podle termínu v RNA kopiích/ml
|
první trimestr
|
|
Porovnejte virovou infekci placenty v různých obdobích těhotenství (první trimestr a termín).
Časové okno: období
|
Analýza virové zátěže podle termínu v RNA kopiích/ml
|
období
|
|
Porovnejte placentární infekci TONV versus ZIKV.
Časové okno: zařazení
|
Analýza virové zátěže v závislosti na viru (ZIKV vs TONV) v RNA kopiích/ml
|
zařazení
|
|
Porovnejte placentární infekci TONV versus ZIKV.
Časové okno: zařazení
|
Analýza genové exprese různých cytokinů v závislosti na viru (ZIKV vs TONV) v RNA kopiích/ml
|
zařazení
|
|
Porovnejte placentární infekci TONV versus ZIKV.
Časové okno: zařazení
|
Analýza histologických lézí v závislosti na viru (ZIKV vs TONV) v RNA kopiích/ml
|
zařazení
|
|
Zvýrazněte buněčné cíle TONV.
Časové okno: zařazení
|
Histologická analýza a značení buněk TONV v RNA kopiích/ml
|
zařazení
|
|
Zvýrazněte buněčné cíle TONV.
Časové okno: zařazení
|
Histologická analýza a značení placentárních buněk v RNA kopiích/ml
|
zařazení
|
Spolupracovníci a vyšetřovatelé
Termíny studijních záznamů
Hlavní termíny studia
Začátek studia (Odhadovaný)
Primární dokončení (Odhadovaný)
Dokončení studie (Odhadovaný)
Termíny zápisu do studia
První předloženo
První předloženo, které splnilo kritéria kontroly kvality
První zveřejněno (Aktuální)
Aktualizace studijních záznamů
Poslední zveřejněná aktualizace (Aktuální)
Odeslaná poslední aktualizace, která splnila kritéria kontroly kvality
Naposledy ověřeno
Více informací
Termíny související s touto studií
Klíčová slova
Další relevantní podmínky MeSH
Další identifikační čísla studie
- 2020-A01318-31
Plán pro data jednotlivých účastníků (IPD)
Plánujete sdílet data jednotlivých účastníků (IPD)?
Informace o lécích a zařízeních, studijní dokumenty
Studuje lékový produkt regulovaný americkým FDA
Studuje produkt zařízení regulovaný americkým úřadem FDA
Tyto informace byly beze změn načteny přímo z webu clinicaltrials.gov. Máte-li jakékoli požadavky na změnu, odstranění nebo aktualizaci podrobností studie, kontaktujte prosím register@clinicaltrials.gov. Jakmile bude změna implementována na clinicaltrials.gov, bude automaticky aktualizována i na našem webu .